DNA的提取(34张).pptVIP

课题1 DNA的粗提取与鉴定 1 基础知识 2mol/L浓度可使DNA溶解； 0.14mol/L浓度可使DNA析出。 0 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 一、DNA的溶解性 二、酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精； 三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 四、大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 六、DNA的鉴定 ①DNA与二苯胺（沸水浴加热）会被染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ②甲基绿（绿色） 实验设计 2 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 加入洗涤剂和食盐的作用分别是？ 如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解 会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 （三）去除滤液中的杂质 方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。 方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉中木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 方案三：将滤液放在60-75℃的恒温水浴中保温10-15℃，注意严格控制温度范围。 （四） DNA的析出与鉴定 1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入 与滤液体积相等的、冷却的 酒精溶液（体积分数为95%）， 静置2～3min，溶液中会出现 白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。 2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 操作提示 3 2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 2mol/L ⑤过滤→取纱布上的滤物 纱布过滤 ⑥再次溶解DNA 2mol/LNaCl溶液 取滤物 滤液 ⑦加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精 ⑧DNA的鉴定