11植物组织培训-HXY.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 四.pH值 不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的，大多在5.5-6.5左右，一般培养基皆要求5.8，这基本能适应大多数植物培养的需要。  * 种类 最适PH值 种类 最适PH值 杜鹃 4.0 月季 5.8 越橘 4.5 胡萝卜、石刁柏 6.0 蚕豆 5.5 桃 7.0 番茄、葡萄 5.7 五.渗透压 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存 *  培养基各种物质中，糖对培养基渗透压起决定性作用。因此调节渗透压往往从调节糖浓度着手。糖除了作为渗透压调节物质外，还是培养基重要的碳源和能源。另外，甘露醇，山梨醇等也可以作为调节物质。 渗透压调节物质 *   氧气是培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。培养室要经常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。  六.气体 * * 11.2.4 种质保存 超低温保存植物材料的原理与保存动物材料相同。在-196℃的超低温条件下，活细胞内的物质代谢和生命活动几乎完全停止。因此，细胞、组织、器官在超低温保存过程中不会引起遗传性状的改变，也不会丢失形态发生的潜能。 在降温冷冻过程中，如果细胞内的水发生结冰，也会造成植物细胞结构不可逆性的破坏而死亡。因此，种质超低温保存成功的关键是在于降温冷冻过程避免细胞内结冻。需使用冷冻保存剂，选择合适的降温冷冻速度和化冻方式。 * 1.超低温保存方法 （1）材料的选择 对组织培养的材料，在保存前要对其加速传代，以提高分裂细胞的比例。 （2）预处理 加入预冷的保护剂（0℃），处理20-60min，提高细胞抗寒力。 （3）降温冰冻 四种方法：1.快速冷冻2.慢速冷冻3.预冻4.逐级降温 （4）采用迅速解冻法。30-40 ℃。 （5）活力测定 TTC或FDA染色法测定细胞活力和存活率。 （6）再培养 根据植物种类，提供和满足原来培养条件进行培养，使细胞恢复分裂能力，诱导器官分化和植株再生。 * * 2.超低温保存的意义 （1）能保持细胞培养物的稳定性。 （2）长期保存植物种质资源。 （3）长期保存农作物的优良品种及其育种亲本材料的种质。 * /u52/v_Mjk5Mzg5NjE.html 烟草叶片的组织培养实验操作视频： /u97/v_OTU2NTIxMjY.html * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成Fe S04和Na2EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeS04会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。 * 4、有机成分母液的配制 MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，注意称量时用电子分析天平。并贮存在棕色无菌瓶中 。 配制生物素、叶酸，用稀氨水溶解，然后定容。 * 5、植物生长调节剂母液配制 一般植物生长调节剂母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是：（１）配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。以后者效果好。（２）细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，或直接用1mol/L HCl溶解，再用蒸馏水定容。  * 注意：所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期，所有的母液都应保存在0-4℃冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。 * 1、计量 根据配制培养基的量和母液的浓度计算需要吸取母液的量。2、移液取医用瓷缸一只，加入少量的蒸馏水，按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于医用瓷量杯中备用。3、称取琼脂、蔗糖备用4、融化用搪瓷量杯量取600～700ml的蒸馏水放