红椿SRAP反应体系优化及引物筛选.pdfVIP

林业科学研究 ２０１７，３０（１）：１０ １７ Ｆｏｒｅｓｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＤＯＩ：１０．１３２７５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｋｘｙｊ．２０１７．０１．００２ 红椿 ＳＲＡＰ反应体系优化及引物筛选 李 培 ，阙青敏 ，王 芳 ，李俊成 ，朱 芹 ，廖柏勇 ，陈晓阳１ １ １ １ ２ １ １ * （１．华南农业大学林学与风景园林学院广东省森林植物种质创新与利用重点实验室，广东 广州 ５１０６４２； ２．嘉应学院，广东 梅州 ５１４０１５） 摘要：[目的]优化相关序列扩增多态性（ＳＲＡＰ）体系内的不同组分，建立适用于红椿ＳＲＡＰ分子标记的反应体系，并 进一步从ＳＲＡＰ引物组合中筛选出稳定、多态性好的引物组合，为红椿遗传多样性研究奠定试验基础。[方法]针对 ＳＲＡＰ-ＰＣＲ反应体系中５ 个因素各设置８个水平，先利用单因素试验确定浓度梯度，后在确定的梯度范围内选定４ 个水平，按照正交试验Ｌ （４ ）进行优化，结合正交直观分析法和新复极差法对各因素进行优化筛选。[结果]确定５ １６ －１ ２＋ 最优体系为总体系２５ Ｌ，模板ＤＮＡ２５ ｎｇ，上下游引物各０．３ ｍｏｌ ·Ｌ ，Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶 １Ｕ，Ｍｇ ２．５ ｍｍｏｌ · μ μ －１ －１ Ｌ ，ｄＮＴＰ０．３ ｍｍｏｌ ·Ｌ 。利用稳定的ＳＲＡＰ-ＰＣＲ体系，从１ ５０５ 对ＳＲＡＰ引物组合中筛选出３０对优质引物组合。 [结论]通过不同种源红椿基因组ＤＮＡ 的重复验证，获得了稳定清晰、多态性较强的扩增条带，表明所确定的最优体 系稳定可靠，适用性较强，可用于不同种源红椿遗传多样性研究的后续实验。 关键词：红椿；ＳＲＡＰ分子标记；反应体系；引物筛选 中图分类号：Ｓ８１７．４６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１-１４９８（２０１７）０１-００１０-０８ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｉｍｅｒｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆＳＲＡＰ-ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｔｏｏｎａ ｃｉｌｉａｔａ Ｒｏｅｍ． ＬＩＰｅｉ ，ＱＵＥ Ｑｉｎｇ-ｍｉｎ ，ＷＡＮＧＦａｎｇ ，ＬＩＪｕｎ-ｃｈｅｎｇ ，ＺＨＵＱｉｎ ，ＬＩＡＯＢｏ-ｙｏｎｇ ，ＣＨＥＮＸｉａｏ-ｙａｎｇ１ １ １ １ ２ １ １ （１．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＦｏｒｅｓｔ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ， Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４２，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉａｙｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｅｉｚｈｏｕ ５１４０１５，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：[Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ]Ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ-ｒｅｌａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ （ＳＲＡＰ） ａｎｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｓｕｉｔａｂｌｅ ＳＲＡＰ-ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｔｏｏｎａ ｃｉｌｉａｔａ Ｒｏｅｍ．，ａｎｄ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｈｉｇｈ-ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂａｎｄ ＳＲＡＰ ｐｒｉｍｅｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ．[Ｍｅｔｈｏｄ]Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｂａｓｉｓｆｏｒｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＴ．ｃｉｌｉａｔｅｗａｓｅｓｔａ