3-2月季的花药培养.ppt

花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。 ⑴诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用 2，4-D、IAA； ⑵诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA代之。 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度等对诱导的成功率都有一定的影响。 培养基的组成： 3、其他因素： 实验操作 材料选取 材料和 消毒 接种和 培养 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 最常用方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗 。 因为月季花蕾外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 问题： 1.接种的对象是什么？ 2.为什么剥离花药时，要尽量不损伤花药并且彻底除去花丝？ 3.每瓶接种花药几个？ 4.培养时需控制什么样的培养条件？ 5.花药长出愈伤组织或释放胚状体后，如何进一步处理？ 6.在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常出现染色体倍性的变化，为什么？ 7.花药培养出现污染的原因有哪些？ （三）接种和培养 （三）接种和培养 1 灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 3 通常每瓶接种花药 ，温度控制在 左右， 。幼小植株形成后才 。 2 在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 4 进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化 无菌条件 不损伤花药 去除花丝 7-10个 25℃ 不需要光照 需要光照 主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的或花粉壁细胞发育成的植株 四、 结果分析与评价 1、选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 2、无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。 3、接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。 植物组织培养技术与花药培养技术的比较 项目 相同点 不同点 植物组织培养技术 离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。 外植体为体细胞，染色体数无需加倍。 花药培养技术 取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。 基础知识 实验操作 被子植物的花粉发育 花粉 双核期 其他因素 接种密度 小孢子四分体时期 影响因素 花粉发育经历的时期 花粉囊 单核期 亲本植株的生长条件 材料低温预处理 月季的花药培养 材料与培养基 材料的选取 产生途径 结果分析与评价 消毒 花粉 培养条件 接种和培养 课堂小结 练习1 F2代紫色甜玉米的基因型组成可能为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育种方法，将F2代中的紫色甜玉米与白色甜玉米（aasusu）进行测交，可以选择出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米。但这种方法比较繁琐，耗时也较长，需要至少三年的选种和育种时间。 如果利用花药培养