实验一、植物组培室基本设备及培养基配置.docVIP

植物组织培养实验 实验一 植物组培室基本设备及培养基配置 一、实验目的： 了解植物组织培养实验室的基本设备及其用途、并掌握使用方法；学习培养基的配制方法。 二、实验过程： （一）组培室基本设备： 1、超净工作台：由鼓风机、中效及高效过滤板、紫外灯、照明灯、工作台面、控制面板组成。 2、高压灭菌锅：由内锅、外锅、进水口、出水口、安全阀、排气管、压力表、电热管等组成。 3、其它设备：天平、冰箱、培养架、接种器具、培养瓶及其它一般实验室常用仪器、玻璃器皿等。 （二）培养基配制：（以配制1升MS培养基为例） 1、母液配制； 2、1升MS培养基配制： （1）培养基配制：取大量元素50ml；微量元素、铁盐、维生素、肌醇各10ml；琼脂4.5g；糖30g、激素用量按培养要求加入，定容1000ml，加热至800C左右至琼脂溶解。 （2）调整pH：用0.5.0N NaOH或0.5N HCl调整pH，一般要求pH 5.8—6.0。 （3）分装：趁热把培养基分装入培养瓶，旋紧瓶盖，置于高压锅内。 （4）灭菌：接通高压灭菌锅电源，加热至压力为0.1MPa，停电，排气至压力为0，再加热至压力为0.1 Mpa，保温20分钟，停电，排气至压力为0，取出培养基，置于干净的场所。灭菌过的固体培养基在温度600C左右时不能摇动，否则会影响凝固效果。 实验二 植物茎段培养 一、试验目的：以植物茎段为外植体，诱导茎段侧芽萌发形成单芽。二、实验材料：木薯带腋芽的茎段。 三、实验设备：超净工作台，各种接种用具等。 四、实验方法： 1、取1—3月龄木薯幼茎，切成带一个节的约1.5cm长的茎段，用自来水冲洗5分钟， 2、接种前，打开超净工作台紫外灯20—30分钟，关紫外灯，打开风机20分钟，用75％酒精擦超净台台面。接种人员洗净双手，用75％酒精擦双手，然后可以开始接种。 3、在超净工作台内，用0.1％升汞溶液浸泡木薯茎段8—9分钟，无菌水冲洗3—5次。接种于MS+6-BA3mg/L的培养基中。 4、3天后可观察是否污染，7天左右可观察到腋芽是否萌发。 5、待侧芽长出4—5节时，可将腋芽剪成带1—2个腋芽的节段，继代进行增殖培养。 实验三 百合鳞片培养 一、实验目的：通过百合鳞片培养，诱导不定芽形成。 二、实验材料：百合鳞茎 三、实验设备：超净工作台，各种接种用具等。 四、实验方法： 1、把百合鳞茎剥开，洗去上面泥土，用洗衣粉溶液浸泡10min，自来水冲洗5min，再用高锰酸钾溶液浸泡10min，自来水冲洗10min。 2、接种前，打开超净工作台紫外灯20—30分钟，关紫外灯，打开风机20分钟，用75％酒精擦超净台台面。接种人员洗净双手，用75％酒精擦双手，然后可以开始接种。 3、 在超净工作台内用75％酒精表面灭菌30s，无菌水冲洗一次， 0.1％HgCl溶液中灭菌12min，再用无菌水冲洗5－6次，接种于MS+6-BA33mg/L的培养基中。 4、约1~2周后可观察到不定芽形成。 3