对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方法 四氯化碳模型 酒精模型.pdfVIP

对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方法 1 原理 四氯化碳（CC14）受到肝微粒体酶活化成为三氯甲烷自由基（CC13·）与蛋白质共价结合导致蛋白合成障 碍、脂质分解代谢紊乱，引起肝细胞内甘油三酯（TG）蓄积。CC13·也能迅速与O2 结合转化为过氧化三氯 甲烷自由基（CC13O2·）导致脂质过氧化，从而引起细胞膜的变性损伤，至使酶渗漏以及各种类型的细胞 病变，甚至坏死。 2 实验动物 成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠180-220克，每组8-12只，小鼠18-22克，每组10-15只。 3 实验方法和步骤 3.1 剂量和分组 至少设三个剂量组，同时设空白对照组和模型对照组，必要时设溶剂对照组。按人体每日推荐量的5-10倍 为中剂量（等效应剂量），下、下各设一个剂量组，最高剂量不得超过人体每日推荐量（以公斤计）的30 倍。用CC11（分析纯）造成肝损伤模型，小鼠CC14灌胃浓度为1%，以食用植物油稀释，灌胃量5ml/kgBW， 大鼠灌胃浓度为2-3%，灌胃量5ml/kgBW（折合CC14的剂量为160mg/kgBW）。 3.2 给予受试样品的途径和时间 经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲料摄入量或饮 水量。 3.3 实验步骤 每日经口灌胃给予受试样品，空白对照组和模型对照组给予蒸馏水。将动物每周称重两次，以调整受试样 品剂量。于实验第30天将各组动物隔夜禁食16小时，模型组及各样品组一次灌胃给予CC14，空白对照组 给植物油，受试组继续给予受试样品至实验结束（与CC14灌胃间隔4小时以上）。给予CC14后，根据实 际情况于24或 48小时处死动物，取血分离血清，测定ALT、AST、，并取肝脏进行病理组织学检测。 3.4 检测指标 血清谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），肝脏病理组织检查 4. 血清谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST）的测定： 4.1 测定方法：可选用全自动生化分析仪或赖氏法（试剂盒）测定。 4.2 数据处理和结果判定 采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，P≥F0.05， P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适 当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方 差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 受试样品组的ALT、AST与模型对照组比较，差异有显著性，可分别判定ALT、AST结果阳性。 5. 肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定 5.1 实验材料：取大鼠肝脏左叶用10%福尔马林固定，从肝左叶中部做横切面取材，常规病理制片（石蜡 包埋，H.E染色）。 5.2 镜检：从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续记录70个视野（占整个的1/2， 记录面积约32mm2）。可见小叶小心性肝细胞的退行性病变和少数细胞坏死。主要病变类型有肝细胞气球 样变、脂肪变性、胞浆凝聚、肝细胞水样变性和细胞坏死等。 5.3 评分标准： 分别记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，并累计所观察视野的病变总分。 肝细胞气球样变：（细胞肿大，胞浆残留少许。） 大致正常 0分 气球样变的肝细胞占整个视野的1/4 1分 气球样变的肝细胞占整个视野的1/2 2分 气球样变的肝细胞占整个视野的3/4 3分 气球样变的肝细胞占整个视野 4分 肝细胞脂肪变性：（肝细胞胞浆内出现界限清晰的脂滴空泡。） 大致正常 0分 脂肪变性的肝细胞占整个视野的1/4 1分 脂肪变性的肝细胞占整个视野的1/2 2分 脂肪变性的肝细胞占整个视野的3/4 3分 脂肪变性的肝细胞占整个视野 4分 胞浆凝聚：（胞浆嗜伊红增强） 大致正常