VB2的测定解析.pptVIP

* 荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量 一、实验目的： 1．学习和掌握荧光光度分析方法 2．了解荧光分光光度计的结构及使用方法 二、实验原理： 维生素B2结构式 维生素B2，又叫核黄素， 橘黄色,无臭的针状晶体 易溶于水而不溶于 乙醚等有机溶剂 在中性或酸性溶液中稳定 光照易分解，对热稳定 * 维生素B2水溶液在430-440nm蓝光或紫外光照射下 会发生绿色荧光，荧光峰在535nm,在pH=6-7溶液 中荧光强度最大，在pH=11的碱溶液中荧光消失， 所以可以用荧光光谱法测定维生素Ｂ2的含量 三、实验用品： 1．仪器： 荧光分光光度计，移液管，容量瓶，棕色试剂瓶， 比色管，烧杯，离心机，离心管 2．药品： 核黄素（生化试剂），冰醋酸（AR）,盐酸（AR） 氢氧化钠，市售维生素B2片剂 四、实验步骤： 1、试剂溶液的配制 1）5％醋酸溶液: 取5份冰醋酸与95份体积蒸馏水混合 2）10.0mg·L-1VB2标准溶液： 准确称取10.0mgVB2 于少量的5%HAc中溶解 转移 至1L容量瓶中用5%HAc稀释至刻度 置阴凉处保存 3）待测液： 准确称取市售VB2一片 于50mL烧杯中 加入约12mL 5%HAc溶液，用玻璃棒捣碎药片 水浴加热至透明 冷却，转移并加入5%HAc溶液定容至100 mL 过滤 清液备用 2、激发光和荧光波长的选择 准确取10.0mg·L-1VB2标准溶液5.0 mL于50mL容量瓶中 定容 (2) 转移部分溶液至石英比色皿中 (3) 将荧光分光光度计的荧光波长暂定在525 nm处 在200－500 nm波长范围内对激发波长进行扫描 约在265、372、442nm有三个峰 (4) 然后将激发波长设定在442nm处 在400－700nm波长范围内对荧光波长扫描 约在525nm处荧光强度最大 从激发和发射光谱上确定最佳的激发和发射波长 3、标准曲线的制作及样品的测定 项目 参比液0 1 2 3 4 5 待测液6 加入VB2标准溶液体积/mL － 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 － 加入VB2待测液体积/mL － － － － － － 0.5 00 用H2O定容至50 mL ，摇匀，测定 … … … … … … … ρ(VB2) /mg·L-1 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 荧光强度(F) 1）．用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线 2）．根据待测液的荧光强度，从标准工作曲线上求得其浓度 4、结果的计算：