一种快速提取基因组DNA的方法.pdfVIP

中国生物工程杂志ChinaBiotechnology，2008，28(3)：69-73 ——．_—-．_—卜__．_-卜·_．_-卜—_．——卜-+—_ ：技术与方法； k-+—_H¨．-·_．呻+．．—．+_+．—+．．+／ 一种快速提取基因组DNA的方法木 卢瑛1 刘照关2 徐宏1 古宏晨1．’ (1上海交通大学微纳科学技术研究院微米／纳米加工技术国家重点实验室薄膜与微细技术教育部重点实验室上海200030) (2上海奥润微纳新材料科技有限公司上海200233) 摘要采用氧化硅超顺磁性纳米磁珠和自己设计的试剂体系及提取流程，建立了一种基因组 DNA的快速提取方法，该方法以氧化硅磁珠为固相吸附载体，盐酸胍、B．巯基乙醇和SDS为主要 裂解吸附试剂。以全血或培养细胞为实验材料进行基因组DNA的提取结果显示建立的方法提取 100 切和PCR生物操作要求。该方法整个提取过程只需12分钟，不需特殊实验条件同时可省略蛋白 酶K的消化过程和离心操作，适用于一般实验室的需求，是一种操作简便、快速高效的提取方法。 关键词氧化硅超顺磁性纳米磁珠基因组DNA全血培养细胞 中图分类号Q52 DNA是遗传信息的载体，是分子生物学研究的主 作较为方便，但该法没有克服需要蛋白酶K消化的不 要对象。因此DNA样品的提取和分离纯化也是分子 生物学各类实验不可缺少的一个环节。在临床诊断 法，主要改进在于用促溶剂NaI代替SDS．蛋白酶K裂 中，常从人体组织，如血清或血浆、组织切片等中分离 解细胞和降解蛋白质，从而减少了DNA提取时间且降 纯化DNA，然后用于疾病的诊断以及组织配型¨”1。低了费用。赵书平等。刊用碘化钾(KI)代替碘化钠也取 全血因为方便易得，所以是临床分子诊断中主要DNA 得了同样的效果。研究者还发现固相载体，如二氧化 样品的主要来源。目前，用以分离纯化基因组DNA的 硅、玻璃珠、硅藻土等在高浓度促溶剂(如碘化钠、高氯 方法较多，最经典的方法就是SDS刁呈白酶K／苯酚氯仿酸钠、胍盐等)存在下能特异性结合DNA坤以¨。Boom 法(简称酚一氯仿法)Ho。该方法提取的DNA纯度较 等¨u成功地用硅粒或硅燥土从临床标本如血浆或尿液 高，适用于各类分子生物学实验。但是该法所用蛋白 中提取了病原菌基因组DNA。目前在实验室中得到广 酶K消化时间一般需要几个小时，耗时长。此外酚和 泛应用的硅胶离心柱试剂盒也是使用硅基质材料载体 氯仿对人体有害，且易造成环境污染，同时提取过程需 来吸附DNA，再通过离心方式以去除其他生化成分如 要反复抽提，步骤繁琐，易造成DNA的丢失和样本污 蛋白质、多糖、脂类等¨引。与酚．氯仿法相比，固相吸附 染。其后研究者在该法基础上又建立了许多改良法， 方法操作简便，不使用有毒有害试剂，但是固液分离时 如Miller等口1创立了盐析法，该法与酚．氯仿法的主要 往往需要通过离心或抽滤等手段来进行试剂体系的交 区别在于用饱和氯化钠(NaCI)盐析蛋白质，使DNA 换和DNA的回收，不太适用于自动化平台。随着纳米 得到分离纯化，而不需要苯酚、氯仿反复抽提核酸，操 技术的发展，近年来又发展出以磁性微粒作为固相载 收稿日期：2007-11—18修回日期：2008-01-24 体的DNA提取方法。如Sonti等¨列通过将生物素标记 }国家“863”计划(2006AA032359)，上海科委基金(0652mn012， 的DNA寡核苷酸探