一株深海来源苏云金芽孢杆菌SWJS07所产蛋白酶的分离纯化及性质研究.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2015, Vol.31, No.8 一株深海来源苏云金芽孢杆菌SWJS07 所产 蛋白酶的分离纯化及性质研究 赵谋明，郇惠杰，雷芬芬，崔春 （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640） 摘要：利用超滤、硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱层析、Sephadex G-75 分子筛柱层析对一株南海深海来 源菌苏云金芽孢杆菌 （B. thuringiensis ）SWJS07 所产蛋白酶进行分离纯化，纯化后经SDS鉴定达到电泳纯，相对分子质量为 37.0 kDa ，酶的比活力提高了6.39 倍，回收率为37.14%。研究其酶学性质表明，该蛋白酶最适催化温度为55 ℃，在30 ℃~45 ℃下 稳定性较高，保温300 min 残留酶活在80%以上；最适pH 6.5 ，在pH 6.0~9.0 蛋白酶稳定，4 ℃放置24 h 残留酶活在80%以上；2mM 2+ 2+ 2+ 2+ 3+ 2+ 2+ Ca 、Mn 对蛋白酶有不同程度的激活作用，而Hg 、Cd 、Al 则强烈地抑制蛋白酶活；当在蛋白酶中添加2 mM Ca 、Mn 时， 其最适催化温度分别为60 ℃和55 ℃，蛋白酶活分别提高了32.86%和28.35%，60 ℃保温30 min 相对酶活基本保持不变，与纯酶（相 对酶活残留2 1.02% ）相比蛋白酶的热稳定性显著提高；EDTA-Na 可强烈抑制蛋白酶活，推测该蛋白酶属于金属蛋白酶。 2 关键词：苏云金芽孢杆菌SWJS07；蛋白酶；分离纯化；酶学性质 文章篇号：1673-9078(2015)8-165-170 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.8.027 Purification and Characterization of Protease from Marine B. thuringiensis SWJS07 ZHAO Mou-ming, HUAN Hui-jie, LEI Fen-fen, CUI Chun (College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract: The protease produced by the marine strain B. thuringiensis SWJS07 was purified to homogeneity by ultrafiltration, ammonium sulfate precipitation, anion-exchange chromatography (DEAE-Sepharose Fast Flow) and gel filtration chromatography (Sephadex G-75), with a 6.39-fold increase in specific activity and 37.14% recovery and the molecular weight was estimated to be 37.0 kDa on SDS. The optimal temperature and pH for