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TN40 HPAE-PAD 法分析糖蛋白单糖 引言 高效阴离子交换色谱与脉冲安培检测法是简单方便的单糖组成分析的有效方法。无需对 样品衍生，等度条件下即可实现分离。在TN20 中，Dionex 公司对HPAE-PAD 法分析糖类 化合物进行了详细论述。CarboPac PA10 分析柱、Amino 捕获柱和Borate 捕获柱于1996 年 被Dionex 公司引入来改善HPAE-PAD 法分析糖类化合物。新柱子改善了单糖的分辨率，消 除了蛋白质水解产生的干扰。 本注解描述了 HPAE-PAD 法分析糖类化合物的准确度、检测限和线性。通过对两套系 统分别测试，比较了系统间的差异。 装置 Dionex DX-500 BioLc 色谱系统，包括： LC30 柱温箱；GP40 梯度泵；ED40 电化学检 测器；AS3500 自动进样器；Peaknet 色谱工作站 本研究中使用了两套DX500 色谱系统，每一套使用不同的柱子。 试剂和标准 氢氧化钠，50% w/w （Fisher Scientific ） 六种单糖的标准（P/N 43162 ），包括：海藻糖（Fuc ）、半乳糖胺（GalN ）、葡萄糖胺（GlcN ）、 半乳糖（Gal ）、葡萄糖（Glc ）和甘露糖（Man ）、 2-脱氧-D-葡萄糖（2d Glc ），参考级。 条件 柱子：CarboPac PA10 分析柱（4 ×250mm，P/N 46110 ） Amino 捕获柱（P/N 46122 ）；Borate 捕获柱（P/N 47078 ） 流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样体积：10μL ED40 检测波形： 时间（秒） 电位（伏特） 积分 0.00 +0.05 0.20 +0.05 开始 0.40 +0.05 结束 0.41 +0.75 0.60 +0.75 0.61 -0.15 1.00 -0.15 1 淋洗液：A ：去离子水，18MΩ-cm；B ：200mM NaOH 方法： 时间（分钟） A （% ） B （% ） 0.0 91 9 11.0 91 9 11.1 0 100 17.6 00 100 17.7 91 9 40.0 91 9 样品和溶液的准备 淋洗液 200mM NaOH ：淋洗液的配制请参见TN20 。使用 18mM 氢氧化钠作淋洗液时，流速 1.5mL/min，检测器的基线噪音在20nC 。过高的基线噪音表明水不纯。生物污染的水中可能 含有痕量的葡萄糖和其他碳水化合物。 糖类化合物标准 本研究中使用了Dionex 公司的六种单糖标准（P/N 43162 ）。每个瓶中均含有100 （±6 ） nmol 的果糖、半乳糖胺、葡萄糖胺、半乳糖、葡萄糖和甘露糖。另外，选择2-脱氧-葡萄糖 为内标，因为它可以与其他单糖很好的分离，而且哺乳动物糖蛋白中没有这种单糖（图1）。 当六种单糖标准中加入2-脱氧-葡萄糖后，本技术中实际是七种单糖标准。