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利用免疫共沉淀验证抗增殖蛋白与HSP70的相互作用_刘晓华.pdf
# 3 6 # 20 0 0 28 5 J Prev Med Chin PLA October 20 0 Vol. 28 No. 5
HSP70
刘晓华, 张志清, 战锐, 王新兴, 王立群,
冷 雪, 杲修杰, 钱令嘉*
( , 300050)
: 利用免疫共沉淀技术验 抗增殖蛋白( PHB) 与HSP70 间的相互作用, 为研究
应激时HSP70 促进PHB 进入线粒体的机制提供科学依据 采用 Western blot 方法检测
HEK293 细胞中PHB 与HSP70 的表达构建抗增殖蛋白真核表达载体pEGFP- N - PHB, 经酶切
鉴定正确后, 将其转染HEK293 细胞, 采用荧光倒置显微镜观察转染效率收集转染的HEK293
细胞, 利用免疫共沉淀技术验 PHB 与HSP70 之间的相互作用在HEK293 细胞中, HSP70
具有较高的表达量, 而PHB 的表达量非常低构建了抗增殖蛋白真核表达载体 pEGFP- N -
PHB, 转染HEK293 细胞的效率达到90% 以上在抗体沉淀的PHB 相互作用蛋白复合物中, 可
以检测到HSP70 的存在构建了抗增殖蛋白融合蛋白真核表达重组载体, 在HEK293 细胞
中高表达抗增殖蛋白后, 利用免疫共沉淀技术 实PHB 与HSP70 之间存在相互作用
: ; HSP70; ;
: Q503 :A : 00 - 5248(20 0) 05- 03 6- 04
16- 82
( prohibitin, PHB) HSP70
, , HSP70 PHB
, , ,
, HEK293 HSP70
1-22
, HSP70
, PHB
132
PHB ;
, PHB , 1
142
HSP70 MSF( mitochondrial 1. 1 pGBKT7- PHB
stimulating factor) , ; BamH ÑEcoR Ñ DNA
, , DL2000 DNA Ligation Kit TaKaRa
152
, ; Opti- MEM Lipofectamine 2000 Invit-
rogen ; DH5A
: (No. No. 2 @ Pfu PCR Master-
No Mix ;
: ( 973- ) , , , ,
1. 2 HEK293
* 1. 3 Bio- Rad
20 0 0 28 5 J Prev Med Chin PLA October 20 0 Vol. 28 No. 5 # 3 7 #
, Olympus
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