支原体肺炎的相关检测专题.docVIP

南海区大沥医院检验科 第4期（2010年07月） 主题：支原体肺炎的检测 肺炎支原体（Mp）是成人和学龄期儿童呼吸道感染及非典型性肺炎的重要病原体之一，已越来越受到人们的关注。感染初期症状与流感相似，临床上常针对细菌、病毒用药，往往效果不佳，只能选择影响病原微生物蛋白质合成的一类抗生素如大环内酯类抗生素。故临床早期诊断、早期治疗可明显缩短Mp感染病程。发达国家已将肺炎支原体的实验室诊断列为呼吸道感染性疾病的常规检测项目。目前，用于检测Mp感染的实验诊断方法主要有血清学检测、Mp培养分离及PCR等。 一. 血清学检测 诊断Mp感染的传统方法为血清学检测，而其需等到机体产生抗体后才能应用。血清学检查早年应用冷凝集试验，目前多用明胶颗粒凝集法测Mp总抗体，酶联免疫吸附试验（ELISA)和金标法测定Mp特异性抗体(IgM和IgG)。 1. ELISA和金标法测Mp特异性抗体 血清内最早出现的是特异性IgM和IgA抗体，特异性IgA出现维持时间很短，不具检测意义。Mp IgM一般在感染后1周出现，3～4周达高峰，以后逐渐降低，l2～16周转阴。由于MP感染的潜伏期为2～3周，当患者出现症状而就诊时，IgM抗体已达到相当高的水平，因此MP IgM 阳性可作为急性期感染的诊断指标。如MP IgM阴性不能否定MP感染，需检测MP IgG。MP IgG较IgM 出现晚，其浓度峰值出现在Mp感染者出现症状后的第5周。但在体内持续存在时间长。因而需动态观察，如果显著升高提示近期感染，显著降低处于感染后期。因此提示IgG与IgM联合检测，可提高诊断率。 金标法与ELISA相比操作更简便单人份检测。金标法适用于急诊等无实验条件的单人分快速检测，而ELISA法敏感性和特异性高，且重复性好，采用标准化操作，可作为临床实验室作为肺炎支原体的常规检查。 2. 明胶颗粒凝集法测Mp总抗体 颗粒凝集法用日本富士提供的试剂盒，用明胶颗粒取代传统动物红细胞作为载体，从而消除许多非特异性反应。检测肺炎支原体总抗体(包括IgG，IgA和IgM)，滴度≤1：40为正常，≥1：80为阳性。Mp急性感染后IgM的水平和持续时间在不同个体中差异较大，儿童反应一般强于成人，约占50%的成人患者无法在肺炎支原体感染后测到IgM的升高，肺炎支原体特异性IgG的出现晚于IgM且在体内的维持时间较长，但在感染数月后仍会下降到较低水平，有些儿童无法测到明显的IgG反应，肺炎支原体特异性IgA的免疫反应与IgM类似，但其在成年人尤其是老年人中的反应水平更高。肺炎支原体抗体在体内产生的时间不同，因此联合检测抗肺炎支原体抗体（IgA+IgM+IgG）可以较早期诊断肺炎支原体感染。 南海区大沥医院检验科 第4期（2010年07月） 主题：支原体肺炎的检测 三 肺炎支原体(MP-DNA)定性检测 血清学检测Mp IgM不能解决一些假阳性和假阴性问题，如免疫力低下患者，感染后抗体滴度低，治愈后患者仍有一定强度的抗体滴度 。MP感染临床症状出现后7～10d是IgM抗体检测的最佳时机(窗口期)，患儿发病初期(窗口期内)血清MP IgM检测往往为阴性，容易漏诊和误诊，这也是血清中MP IgM抗体检测阳性率低于咽拭子标本进行MP DNA检测阳性率的原因。另外如上所述，血清MP IgM检测阳性率受年龄、时间、B细胞功能及敏感性等因素的影响，往往不能对MP感染做出早期诊断。而实时PCR(real time PCR)将PCR的敏感性和探针杂交的特异性合二为一应用于MP感染的诊断，是目前公认的准确性和重现性最好的核酸分子技术。 采用PCR技术对检测Mp DNA的灵敏度、特异度高，可用于Mp感染的早期诊断。Mp DNA存在于急性感染期．且不受抗生素治疗的影响．PCR方法可以早期检测出咽拭子中的MP DNA，对诊断和鉴别诊断支原体肺炎有较高的临床价值，其还具有实验时问短、不存在交叉反应和放射性污染等特点，但需昂贵设备，操作复杂，不易在我们基层开展。 南海区大沥医院检验科 第4期（2010年07月） 主题：支原体肺炎的检测 附：支原体肺炎检测项目汇总 项目名称 样本 检测方法 临床应用 检测单位 肺炎支原体半定量 血清 明胶颗粒法 检测抗肺炎支原体总抗体（IgA+IgM+IgG）可以较早期诊断肺炎支原体感染。测得的抗体效价高低与Mp感染严重程度呈正相关。 1个工作日（本院） 肺炎支原体抗体（MP-IgM） 血清 ELISA 一般在感染后1周出现，3～4周达高峰，以后逐渐降低，l2～16周转阴。MP IgM 阳性可作为急性期感染的诊断指标。 1个工作日（本院） 肺炎支原体抗体（MP-IgG） 血清 ELISA 浓度峰值出现在Mp感染者出现症状后的第5周。在体内持续存在时间长。需动态观察