SNP位点rs6983267相关非编码RNAG／U对结肠癌细胞转移活性的影响.pdfVIP

山东医药２０１６ 年第５６卷第４５ 期 ＳＮＰ位点ｒｓ６９８３２６７ 相关非编码 ＲＮＡ Ｇ／Ｕ对结肠癌细胞转移活性的影响 蔡文臣，郝小惠，沈阳丽，孟晨雪，田洁，郭志义 （华北理工大学医学实验研究中心，河北唐山０６３０００） 摘要：目的 探讨染色体８ｑ２４ 区域中单核苷酸多态性（ＳＮＰ）位点ｒｓ６９８３２６７ 相关非编码ＲＮＡＧ／Ｕ对结肠癌 细胞转移活性的影响。方法 运用生物信息学方法分析 ＳＮＰｒｓ６９８３２６７ 位点的非编码 ＲＮＡ；收集ＫＭ１２Ｃ 和 ＫＭ１２ＳＭ细胞，提取细胞总ＲＮＡ，逆转录和ＰＣＲ扩增，片段回收后用Ｔｓｐ４５ 进行酶切，对酶切（酶切组）和不做酶 Ⅰ 切（对照组）的模板做ＰＣＲ扩增分析。通过限制性内切酶 ＰＣＲ方法检测两组 ＳＮＰｒｓ６９８３２６７ 位点的非编码 ＲＮＡ Ｇ／Ｕ相对表达量；ＫＭ１２Ｃ和ＫＭ１２ＳＭ细胞分别进行ｐＧＬ３ＧｓＬＵＣ（ｐＧＬ３ＧｓＬＵＣ 组）、ｐＧＬ３ＴｓＬＵＣ（ｐＧＬ３ＴｓＬＵＣ 组）和ｐＧＬ３ＢａｓｉｃＬＵＣ质粒转染，应用双荧光素酶报告基因方法检测两组ＫＭ１２Ｃ和ＫＭ１２ＳＭ细胞中ｒｓ６９８３２６７ 非 编码ＲＮＡ启动子活性。结果 ＥＮＣＯＤＥ数据库显示，染色体８ｑ２４ 区域ＳＮＰｒｓ６９８３２６７位点附近存在非编码基因。 ＫＭ１２Ｃ细胞中酶切组、对照组ＳＮＰｒｓ６９８３２６７位点相关非编码ＲＮＡＧ／Ｕ为０．８０±０．１０、５．６０±１．３０，ＫＭ１２ＳＭ细胞 中分别为０．７１±０．０９、１．４３±０．１１。与对照组比较，ＫＭ１２Ｃ细胞中酶切组ＳＮＰｒｓ６９８３２６７ 位点相关非编码ＲＮＡＧ／ Ｕ差异无统计学意义（Ｐ ０．０５），ＫＭ１２ＳＭ细胞中升高（Ｐ ＜０．０５）。ＫＭ１２Ｃ 细胞中，ｐＧＬ３ＧｓＬＵＣ 组、ｐＧＬ３Ｔｓ ﹥ ＬＵＣ组ｒｓ６９８３２６７ 位点相关Ｇ型与Ｔ型非编码ＲＮＡ启动子相对活性分别为０．８１±０．１４、０．８２±０．２５，ＫＭ１２ＳＭ细 胞中分别为１．００±０．２６、１．８５±０．５８。在ＫＭ１２ＳＭ细胞中，两组比较，Ｐ＜０．０５；在ＫＭ１２Ｃ细胞中，两组比较，Ｐ ﹥ ０．０５。结论 ＳＮＰｒｓ６９８３２６７ 位点相关非编码ＲＮＡＧ／Ｕ可能与结肠癌细胞的转移活性相关。 关键词：结肠肿瘤；肿瘤转移；单核苷酸多态性；ｒｓ６９８３２６７；非编码基因 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２２６６Ｘ．２０１６．４５．００３ 中图分类号：Ｒ７３５．３５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２２６６Ｘ（２０１６） ＥｆｆｅｃｔｏｆＳＮＰｒｓ６９８３２６７-ｒｅＩａｔｅｄｎｏｎ-ｃｏｄｉｎｇＲＮＡＧ／Ｕｏｎｔｈｅｍｅｔａｓｔａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆｃｏＩｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅＩＩｓ ＣＡＩＷｅｎｃｈｅｎ，ＨＡＯＸｉａｏｈｕｉ，ＳＨＥＮＹａｎｇｌｉ，ＭＥＮＧＣｈｅｎｘｕｅ，ＴＩＡＮＪｉｅ，ＧＵＯＺｈｉｙｉ （ＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＮｏｒｔｈＣｈｉｎａｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔａｎｇｓｈａｎ０６３０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳＮＰｒｓ６９８３２６７ｉｎｔｈｅ８ｑ２４ｒｅｇｉｏｎｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｒｅｌａｔｅｄｎｏｎｃｏｄ ｉｎｇＲＮＡＧ／Ｕｏｎｔｈｅｍｅｔａｓｔａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＷｅａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｏｆＳＮＰ ｒｓ６９８３２６７ｂｙｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ＴｈｅＫＭ１２ＣａｎｄＫＭ１２ＳＭｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅ ｃｅｌｌｓ．ＲｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｒｅｃｏｖｅｒｅｄ，ｔｈｅｙｗｅｒｅｄｉｇｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈＴｓｐ４５ ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｄｉｇｅｓｔｅｄ