水处理微生物实验4报告.docVIP

实验四 培养基的配制及灭菌 一、培养基的常规配制程序 （一）目的要求 了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。 了解培养基的配制原理。 （二）基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。 （三）实验材料 1. 药品 待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L NaOH溶液、1mol/L HCl溶液等。 2. 仪器 天平或台秤、高压蒸汽灭菌锅。 3. 玻璃器皿 移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 4. 其它物品 药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。 （四）实验步骤 1. 玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。详见附录一。 2. 灭菌前玻璃器皿的包装 (1) 培养皿的包装：培养皿由一盖一底组成一套。可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 (2) 移液管的包装：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌吹入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1～1.5cm。塞棉花时，可用一外圈拉直的回形针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45o角，折迭纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折迭打结，准备灭菌(见图3－1)。 3. 液体及固体培养基的配制过程 1）液体培养基配制 称量：一般可用1/l00粗天平称量配制培养基所需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用量，然后进行准确称量。 溶化：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻棒搅动，加热溶解。 定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积的溶液，加入到培养基中。 调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪取一小段pH试纸，然后用镊子夹住pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。 过滤：用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。 2）固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5％～2％)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去的水分。 4. 培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉或卷纸，擦去管口或瓶口的培养基。 1）试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹住玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内(图3－2)。 图3－2 培养基的分装 装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度l/4左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中；用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1/3(约10 m1)；半固体培养基分装量为管高的1/3为宜。 2）锥形瓶的分装 用于振荡培养微生物用时，可在250m1锥形瓶中加入50m1的液体培养基；若用于制作平板培养基用时，可在250ml锥形瓶中加入150m1液体培养基，然后再加入3g琼脂粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。 5. 棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎 为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件