分光光度法补充1.pptVIP

Lamber-beer 定律分光光度法计算及应用　 如何测定溶液中离子的浓度 配制一系列浓度已知的标准溶液并显色后，得到浓度与吸光度的关系曲线－－工作曲线。 待测溶液的吸光度得到后，在工作曲线上求得浓度的数值。 1 透射光与吸收光 可见光区，不同波长的光呈现不同的颜色。 透射光和吸收光可组成白光 透射光刺激人眼而使人感觉到颜色的存在 吸收光 ＋ 透射光 ＝白光 吸收光 ＋ 透射光 ＝白光 2 吸收曲线 不同浓度的同一物质，在吸收峰附近吸光度随浓度增加而增大。 最大吸收波长不变 若在最大波长处测定吸光度，则灵敏度最高。 不同物质其吸收曲线的形状和最大吸收波长各不相同。 显色实验 准确移取10?g/mL铁标准溶液5ml于50ml容量瓶中 加入10％盐酸羟胺溶液1ml摇匀，稍冷 加入1mol.L-1醋酸钠溶液5ml和0.1%的邻二氮杂菲溶液3ml，以水稀释至刻度。 邻二氮杂菲－显色剂（生成橘红色液体） 盐酸羟胺－将三价铁还原为二价铁 吸收曲线－确定波长 在721分光光度计上，用2厘米比色皿，以水作参比溶液，用不同的波长从570nm开始到430nm为止，每隔10－20nm测定一次吸光度。 然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制出吸收曲线，从吸收曲线上确定该测定适宜的波长。 3 朗伯－比尔定律 吸光度 A＝lgI0/I I0入射光 I 透射光 透光度 T＝I/I0 A=lg1/T=－ lgT 朗伯定律： 如果溶液的浓度一定，则光的吸收程度与液层的厚度成正比。 A＝lgI0/I=k1b 比耳定律： 如果液层厚度一定，吸光度与溶液的浓度成正比。 A＝lgI0/I=k2c 朗伯－比耳定律： A＝ lgI0/I = abc a－吸光系数,单位是L.g-1.cm-1 b－以厘米为单位 c－以g.L-1为单位 质量浓度 摩尔吸光系数?＝L.mol-1.cm-1 4 朗伯－比尔定律的推导 A= lgI0/I =?bc S-面积 ds-被吸收的面积， ds＝adn a－常数， dn－吸收光的粒子个数。 ds/ S=被捕获的机率 Ix－入射光的光强 dIx－被粒子吸收的光强 -dIx/ Ix=被捕获的机率 -dIx/ Ix= ds/S＝adn/S 两边积分得： lnI0/I= an/S (1) 因为lnI0/I＝2.303 lgI0/I (2) (1)=(2) 2.303lgI0/I= an/ S S=v/b lgI0/I= anb/ 2.303 v 量浓度c=n/6.02x1023v (mol/l) lgI0/I= 6.02x1023 abc/ 2.303 = (6.02x1023 / 2.303 )abc ?= (6.02x1023 / 2.303 )a －常数 A= lgI0/I =?bc 5 偏离比尔定律的原因 工作曲线 非单色光引起的偏离 化学因素引起的偏离 非单色光引起的偏离 因为入射光是复合光。由于物质对不同波长的光的吸收程度不同，引起朗伯－比尔定律的偏移。 若入射光的波长为?1、 ?2。 入射光为?1，A’=lgI0’/I1 入射光为?2，A’’=lgI0’’/I2 测定时：入射光强为 I0’＋ I0’’ 透射光强为 I1＋I2 A=lg（I0’＋I0’’）/（I1＋I2） I1= I0’ 10－ ?1 bc I2= I0’’ 10－ ?2 bc A=lg（I0’＋I0’’）/（I0’ 10－ ?1 bc＋I0’’ 10－ ?2 bc） 当?1＝ ?2，A与c成直线关系 A=lg （I0’＋I0’’）/（I0’ + I0’’ )10－ ? bc =lg10 ? bc= ? bc 当?1? ?2，A与c不成直线关系，偏离定律。 化学因素引起的偏离 朗伯－比尔定律的假设条件： 1 单色光 2 粒子之间无相互作用－在稀溶液中 为什么在浓溶液中会发生偏移？ 在浓溶液中，粒子之间有相互作用，存在缔合、离解、互变异构、络合物的逐级生成、溶质与溶剂的相互作用。 6 光度计的基本部件 光源 单色器 吸收池 检测系统 光度法的优点 使用仪器代替人眼进行测量，消除了人的主观误差，提高了准确度。 分析大批试样时，用标准曲线法可加快分析速度。 选择适当的单色光和参比溶液消除干扰，提高选择性。 * * 空白 1 2 3 4 黄色 蓝色 紫红 黄绿 兰绿 绿兰 红 橙