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食品微生物检验规范操作基础培训2 培养基的制备福建出入境检验检疫局技术中心食品所微生物实验室2010.05 主要内容： § 1　清洗、消毒和灭菌操作 § 2　培养基的制备 § 3　采样和取、制样 § 4　接种、分离纯化 § 5　制片、染色及显微观察 § 6　实验室安全基础知识　 §2培养基的制备 培养基是指以液体、半固体或固体形式，包含天然或合成成分，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。 2.1 培养基的分类 2.1.1根据培养基的组成来源不同来区分: 天然培养基; 合成培养基; 半合成培养基。 天然培养基 天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料。如：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等 优点：营养成分丰富，培养效果好，来源广泛. 缺点：成分难以确切知道。 合成培养基 合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。 这类培养基化学成分精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。 半合成培养基 在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等。 这种培养基在生产实践和实验室中使用最多。 2.1.2根据培养基的物理状态来区分 固体培养基； 液体培养基； 半固体培养基。 液体培养基 所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。 固体培养基 在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂最为常用。固体培养基在实际中用得十分广泛。 在实验室中，它被用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。 半固体培养基 把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2～1%之间。 这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。 2.1.3根据培养基的用途来区分 运输培养基； 保存培养基； 增菌培养基。 运输培养基 在取样后和实验室样品处理前的时间，保护和维持微生物活性的培养基（如Stuart或Amies运输培养基）。运输培养基中通常不允许包含使微生物增殖的物质，但是培养基应能保护菌株，确保它们不变质。 保存培养基 用于在一定期限内保护和维持微生物活力，以防对微生物在长期保存中产生不利影响，或使微生物在长期保存后容易复苏的培养基（如Dorset卵黄培养基）。 复苏培养基 能够使受损或应激的微生物修复，使微生物恢复正常生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基。 增菌培养基 大多为液体培养基，能够给微生物的繁殖提供较适当的生长环境，包括： A.选择性增菌培养基：能够保证特定的微生物在其中繁殖，而部分或全部抑制其他菌体生长的培养基（如SC、LST、RV等）； B.非选择性增菌培养基：能够保证大多数微生物生长的培养基（如M肉汤、营养肉汤）。 分离培养基 支持微生物生长的固体或半固体培养基，包括： A.选择性分离培养基：支持特定微生物的生长而抑制其他微生物生长的培养基（如PALCAM琼脂、TCBS、显色培养基等）； B.非选择性分离培养基：对微生物没有选择性抑制的分离培养基（如脑心浸液肉汤、营养琼脂）。 鉴别培养基 能够进行一项或多项微生物生理学和生化特性鉴定试验的培养基（如尿素培养基、Kligler琼脂等）；能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离/鉴别培养基（如XLD、DHL、TCBS等）。 鉴定培养基 能够产生一个特定的鉴定反应而不需要做进一步确认实验的培养基（如ONPG、氧化酶试剂）。用于分离的鉴定培养基被称为分离/鉴定培养基（如显色培养基）。 显色培养基是在选择性培养基上加入了适量的带发色及荧光基团的酶底物，发色团（荧光团）与特殊酶可识别的基团相连。目标微生物产生一些特殊的可水解发色及荧光底物的酶，使得发色和荧光基团释放出来，从而使目标微生物带上易于辨别的