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血液实验实验报告 09 生物技术 摘要：血液在体内承担着物质运输、免疫等重要的生理功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异，对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。制作血涂片用于观察红细胞、白细胞、血小板形态；使用血细胞计数板于显微镜下直接计数，计算分别得到红细胞、白细胞数目。 关键字：血液 红细胞 白细胞 血细胞计数 血涂片 前言 血液在维持内环境稳定上起着重要作用，具有运输、缓冲、防御等功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异，对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。 动物红细胞的形态、大小、数目与动物的进化和生态适应均有一定的关系，一般来说，动物越高等，红细胞的数目越多，而体积越小，同时血细胞也高度分化；白细胞体积（除鱼类）取末置于玻片的一端,左手持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动载片上保留下一薄层血膜蜡笔在血膜两侧划线以防染液溢出然后将血膜平放在染色架上加瑞氏染液2-3滴使覆盖整个血膜固定0.5-1.0分钟滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水与染料混匀染色5-10分钟用冲去染液,待自然干燥后,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。红细胞淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。颗粒白细胞嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径10-15微米。嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11微米。??? 血小板体形甚小，形态不规则，染淡蓝色，内含紫色颗粒，无核，常聚集成团。 2.2 血细胞计数 2.2.1 材料 鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠、人体血液样品，柠檬酸钠，血细胞计数板，盖玻片，毛吸管。 2.2.2 方法 1．计数原理： 血细胞计数板由一块长约7.5cm、宽3.5cm的厚玻璃制成，在中部1/3面积处有4条槽，内侧两条槽之间还有1条横槽相通，在中部构成2块长方形平台。此平台比整个载玻片平面低0.1mm。平台中部各有一个计数室，每个计数室分九大格，每格边长1mm，面积为1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。四角的大格被划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板及组织培养的细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。 加样后静止2-3min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 红细胞数/L=N*25/（5*10*106*稀释倍数） 白细胞计数/L=N*稀释倍数*10*106/4 第三章 结果 3.1血涂片的制作与观察 3.1.1 鲤鱼、牛蛙、家鸽的血涂片都只观察到了红细胞，经查阅相关资料，白细胞有如下特点： 1、含量少 由于白细胞含量为5000～10000个/立方毫米，而红细胞为400～500万个/立方毫米（男），其比例大约为1∶500（按最高含量），也即，大约观察500个红细胞才能看到1个白细胞。 　　2、颜色浅 白细胞体积比红细胞大，圆球形，是无色有核的细胞。因而，在光镜下观察，由于其透光能力强，所以看到的白细胞颜色浅。 主观因素 主要是来自于实验技能方面不过关。 解决方法： 　　可根据白细胞的透光能力较强这一特点，利用低倍镜找。方法是： 　　首先，应在低倍镜下调节细准焦螺旋，当看清细胞后，再继续向上调，使红细胞模糊不清。 　　然后，移动涂片，边移动边注意观察。会发现在视野中有一些小亮点，如星星在闪烁。将其中一个亮点置于视野中央，然后，再调细准焦螺旋使细胞清晰。观察后发现，此亮点便是要找的白细胞。如需仔细观察，可换高倍镜。但注意光线不要太亮。 3.1.2 家兔、小白鼠血涂片制作失败 血涂片制作失败原因分析： 现象： 以磷酸缓冲液为稀释液配制染剂，配比尝试了1：5，1：7，1:9,细胞几乎均不着色； 以蒸馏水为稀释液配制染剂，配比为1：5，染色较浅，但能看到细胞。 查阅相关资料：缓冲液pH值为6.24时，各血涂片的血细胞染色均较淡，尤其是白细胞中特殊颗粒显示不清，胞核、胞质对比不理想；随着缓冲液pH值的升高，血细胞染色逐渐变深，白细胞中的特殊颗粒逐渐显现，胞核、胞质对比逐渐鲜明；缓冲液pH值为6.98时，血细胞的染色、白细胞中特殊颗粒均显示清晰，胞核、胞质对比鲜明；随着