HPLC高效液相色谱实验讲义.pdf

高效液相色谱法 海南大学材料与化工学院 周雪晴 一.色谱法概述 二.高效液相色谱法（原理、相关术语、分类） 三.高效液相色谱仪（仪器结构与原理） 四.色谱的定性定量分析 五.奶粉中三聚氰胺测定实例 六.液相色谱分析方法的开发 工作原理 用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的 混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样 品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器， 由数据处理系统记录色谱信号或进行数据处理而得到分 析结果。 样品组分分离示意图 色谱术语： 色谱图、保留时间、死时间、 峰高、峰面积、峰宽、半峰宽、 分辨率、柱效、塔板数 色谱分析可以认为进入柱子内的样品成分在流动相中是 呈“正态分布”的，我们可以根据tR （峰的位置〕来定性； 根据峰面积或峰高（h）来定量。 无保留物质 HPLC 系统构成 进样系统 流动相供应系统 自动 进样器 储 液 溶剂输 瓶 送系统 手动 色谱柱 进样阀 数据采集 处理系统 检测器 废液瓶 定量分析 1.归一化法 (Normalized Percent) 2. 外标法 (External Standard) 3. 内标法 (Internal Standard) 定量分析 归一化法定量 将试样中所有组分的含量之和按100％计 算，以它们相应的色谱峰面积为定量参数。如 果试样中所有组分均能流出色谱柱，并在检测 器上都有响应信号，都能出现色谱峰，可用此 法计算各待测组分X 的含量。其计算公式如下： 定量分析 例：分析乙醇、庚烷、苯及乙酸乙酯的混合物。实验测得 它们的色谱峰面积各为5.0、9.0、4.0 、及7.0cm2，由手册 查得它们的相对重量校正因子FＷ分别为0.64、0.70、0.78 及0.79，按归一化法分别求它们的重量百分浓度。 5.0 0.64 （1）乙醇%= 5.0 0.64 9.0 0.70 4.0 0.78 7.0 0.79 100% 3.20 100% 18.15 17.6% 9.0 0.70 （2 ）庚烷= 100% 34.7% 18.15 定量分析 内标法定量 准确称量样品的重量为m克，取一纯物质（内标物）适量，加 入其中，并准