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第 39卷，第 5期 安 徽 化 工 Vo1．39，No．5 17 2013年 lO月 ANHUICHEMICAL INDUSTRY Oct．2013 酶解法替代酸解生产右旋糖酐的新工艺研究 宋丹丹，张洪斌 ，胡雪芹，郭继彬 (合肥工业大学化学工程学院，安徽 合肥230009) 摘要：目的：右旋糖酐酶催化水解工艺替代右旋糖酐发酵工艺中的盐酸水解。方法：以药用右旋糖酐70(1)、右旋糖酐40(2)和右旋糖酐 20(3)的含量为指标，采用HPLC测定指标成分含量，酶催化温度、pH、底物浓度、酶浓度、反应时间为考查因素，确定药用级右旋糖酐水 解的酶催化工艺。条件与结果：制备右旋糖酐70(1)、右旋糖酐40(2)和右旋糖酐20(3)的酶催化工艺 ：底物浓度为7％，酶浓度为2Um／L， 于pH5．0、200dmin、35℃条件下分别反应6070min、70～80rain、90 110min。结论：右旋糖酐酶法催化工艺简单可控，操作性强，适合大规 模生产。 ． 关键词：右旋糖酐酶；右旋糖酐；酶催化；工艺 doi：10．3969~．issn．1008-553X．2013．05．006 中图分类号：TQ929+．2 文献标识码：A 文章编号：1008—553X(2013)05—0017—05 右旋糖酐(Dextran)是主要 由葡萄糖 仅一1，6糖苷键 和棘孢青霉 (Penicilliumaculeatum)。 连接而成 的葡聚糖 。由肠膜状 明串菌株 Leuconstoc 斜面培养基(g／L)：蔗糖 150，蛋 白胨 2．5，Na：HPO · mesenteriodes)产生的右旋糖酐蔗糖酶(Dextransucrase； 12H201．8，琼脂 20．0。 E．C．2．4．1．5)合成的右旋糖酐含有 95％的 Ot一(1，6)糖苷 液体培养基 (g／L)：蔗糖 100，蛋 白胨 2．5，NaHPO · 键，同时含有少量其它糖苷键的分支结构l1l。临床上应用 l2H20 1．8。 的常有 3种规格：右旋糖酐70(1)、右旋糖酐40(2)、右旋 发酵培养基(g／L)：右旋糖酐 70(1)15．0，蛋 白胨 5．0， 糖酐 20(3)，是 目前公认的优 良血浆代用品之一 ，具有 K2HPO4·3H2O 1．0，FeSO4·7H2O 0．01，KC10．5，MgSO4· 增加血容量、改善微循环、防止弥散性血管内凝血的作 7H2O0．5，用 NaOH调 pH至 7．0。 用12]，主要用于治疗失血l生休克l3l。工业上现有的右旋糖 以上培养基在0．1MPa压力下，加热灭菌20rain。 酐生产工艺采用肠膜状明串珠菌发酵生成高分子右旋 2 实验方法与结果 糖酐 ，再用盐酸水解法降解高分子右旋糖酐，其中盐酸 2．1右旋糖酐酶活力的测定 水解的工艺存在如下缺点：①产品中引入氯化物，临床 采用DNS法测定右旋糖酐酶的活力网。酶活力单位 上引起过敏反应 ；②反应过程难控制，右旋糖酐分子量 定义：以3％的1为底物，在 35℃、pH为5．0条件下 ，每 分布不集中。采用右旋糖酐酶水解工艺替代盐酸水解工 分钟产生0．1mg还原糖(葡萄糖当量)所需要的酶量为 艺，一方面不会引人氯离子；另一方面，根据右旋糖酐酶 一 个酶活力单位(u)。 优先降解大分子糖酐的特点 ，通过研究酶解反应条件 ， 2．2右旋糖酐分子量的检测方法(HPLC法) 实现对右旋糖酐降解过程的控制。 色谱条件 ：凝胶色谱柱为TSK—G4000PWxL(7．8 1实验部分 mm ×30cm)；流动相为超纯水，流速为 0．