线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1 )使用说明.pdfVIP

线粒体膜电位检测试剂盒 （JC-1 ）使用说明 货号 ：M8650 规格 ：100T 内容 ： 产品名称 包装 JC-1 （200×） 100µ L/ 管，共 5 管 超纯 90mL JC-1 染缓冲液 （5 ×） 80mL （ ） 20µ L CCCP 10mM 保存条件 ： -20 ℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。超纯水和 JC-1 染色缓冲液（5 ×） 也可 4 ℃保存。 产品简介 ： 线粒体膜电位检测试剂盒 （JC-1 ）是一种以 JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、 组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。 JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位 Ψm △ 的理想荧光探针。可以检测细胞、组 织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形成聚 合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此 时 JC-1 为单体，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线 粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。 通过 JC-1 从红色荧光到绿 色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降， 同时也可以用 JC-1 从红色荧光到 绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。 JC-1 单体的最大激发波长为 515nm ，最大发射波长为 529nm ；JC-1 聚合物的最大激 发波长为585nm ，最大发射波长为 590nm 。实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色 荧光的设置即可。 本试剂盒提供了 CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品， 本试剂盒共可以检测 100 个样品；对于 12 孔中的样品，本试剂盒共可以检测 200 个样品。 操作步骤 ： 1 、JC-1 染色工作液的配制 ： 六孔板每孔所需 JC-1 染色工作液的量为 1mL ，其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的 用量以此类推；对于细胞悬液每 50～100 万细胞需 0.5mLJC-1 染色工作液。取适量 JC-1 （200×），按照每 50µLJC-1 （200×）加入 8mL 超纯水的比例稀释 JC-1 。剧烈震荡充分 溶解并混匀 JC-1 。然后再加入 2mL JC-1 染色缓冲液 （5 ×），混匀后即为 JC-1 染色工 作液。 2 、 阳性对照的设置 ： 把试剂盒中提供的 CCCP （10mM ）推荐按照 1 1000 ∶的比例加入到细胞培养液中， 稀释至 10µM ，处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ，进行线粒体膜电位的 检测。 对于大多数细胞， 通常 10µM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失， JC-1 染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经 JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定 的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。 3 、 对于悬浮细胞 ： （1）取 10～60 万细胞，重悬于 0.5mL 细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚 红。 （2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育 20 分 钟。 （3）在孵育期间，按照每 1mL JC-1 染色缓冲液 （5×）加入 4mL 蒸馏水