胎盘滋养层细胞分离培养研究进展.pdf

动物医学进展。2012，33(3)：97—100 in Medicine ProgressVeterinary ’胎盘滋养层细胞分离培养研究进展 付祥龙，张玉玲，翟小伟，陈晓丽，麻雪刚，靳丽君，刘风军。 (河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003) 摘要：胎盘屏障是营养物质、药物、病毒等从母体进入胎儿的必经之路，与反复自然流产等多种产科疾 病有关。滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成成分，而滋养层细胞具有内分泌的功能，其增殖、功能调节失常 与多种妊娠相关疾病的发生发展有密切关系。为了揭示产科疾病发生、发展的机制，建立滋养层细胞体外培 养的模型是必要的，论文就滋养层细胞分离及培养方法进行了综述。 关键词：胎盘；妊娠疾病；滋养层细胞；分离；培养 中图分类号：R711．4；Q813．1 文献标识码：A 胎盘是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体 2滋养层细胞的分离与纯化方法 子宫内膜联合形成的母子间交换物质的过渡性器 滋养层细胞的分离与纯化方法大体上分为以下 官，含有滋养层细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、霍 两步：单细胞悬液的制备；细胞的分离与纯化。 夫鲍尔(Hofbauer)细胞及血细胞等多种细胞成分， 2．1 单细胞悬液的制备 扮演着供给、排泄、代谢、分泌、免疫等角色。滋养层 目前应用最广泛的是消化分离法。归纳起来有 细胞与毛细血管内皮细胞以及二者间的基膜构成胎 以下6种方法。 盘屏障，成为各种营养物质、某些药物、病毒和激素 2．1．1胰酶／DNaseI酶序贯法，先加入2．5 g／L 等从母体进入胎儿的必经之路。滋养层细胞的增 胰酶在37℃水浴条件下消化10min，再加入0．2 殖、功能调节失常与多种妊娠相关疾病的发生发展 g／LDNaseI酶继续消化10min，最后加入新鲜的 有密切关系，可造成流产、妊娠高血压综合征及胎儿 min， 胰酶及DNaseI酶混合液(1：1)继续消化20 宫内发育迟缓等许多产科疾病。获取足够数量和纯 总消化时间控制在40min左右。张琴等[11采用此 度的细胞，为滋养细胞及相关疾病的研究提供重要 方法获得的细胞悬液以单细胞为主，经台盼蓝染色 的实验基础，促进滋养层细胞及其相关疾病的研究。 后，细胞活性近95％，分离效率在90％左右。 本文就国内外滋养层细胞分离培养方法进行综述和 2．1．2 胶原蛋白酶法 即用lg／L的胶原蛋白酶 分析。 在37℃水浴条件下消化3次，15min／次，收集3次 1滋养层细胞的特点 的消化液，用100目的细胞过滤器进行过滤，将未消 滋养层细胞为一层扁平的上皮细胞，在胎盘形 化的组织按此方法再进行消化。VanselowJ等[21通 成的过程中，可分化为绒毛滋养层和绒毛外滋养层 过此法获得了大量的单细胞，细胞界线清楚，胞浆透 两种表型，即参与营养物质和代谢产物转运的合体 明，核大呈椭圆形，可见少量含多核的合胞体。 滋养层细胞和具有侵袭性的细胞滋养层细胞。在胚 2．1．3蛋白酶+胶原酶+DNaseⅣ酶法即用1 胎的植入过程中，滋养层内的细胞不断侵袭母体子 mg／mL蛋白酶Ⅳ，0．5mg／mL的胶原蛋白酶Ⅳ和 宫，与单个子宫上皮细胞融合形成寿命较短的滋养 50