RT-PCR实验方法总结大全 - 资料中心 - 生物在线.docVIP

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2017-05-08 发布于天津
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实验方法总结大全实验有三步抽提要求做前必需测浓度逆转录体系对量还是有一些要求常用或按要求做一般不会出太大问题按常规但如需扩长片段则对前两步要求较高需要有完整的存在不是单改变浓度退火温度能解决的和时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列必须在时引物设计有种方法即和特异的下游引物如果用和方法是扩增的所有的理论上还要用此产物做的模板继续扩增如果用方法那么要去那里查它的序列呢问题在做遇到一怪现象即对同一动物不同组织扩增同一段基因结果从一种组织中可以扩出我的目的基因条带非常的好而另一组织在同样的条件下

RT-PCR实验方法总结大全RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。?3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDN