孙焕林--------不同来源的牛皮肤成纤维细胞原代培养效果对核移殖胚发育的影响.pdfVIP

and 2009筇第45卷第19期 ReproductionPhysiology·繁疆生理 不同来源的牛皮肤成纤维细胞原代 培养效果对核移殖胚发育的影响 孙焕林，方南洙+，胡艳明，林涛，刘佳丽，孔金超，李钟淑 (延边大学农学院动物遗传育种与繁殖实验室，吉林龙井 133400) 摘 要：培养延边黄牛不同部位(耳部和腹部)和不同品种(黑白花、利木赞、延边黄牛)耳部的皮肤成纤维细胞， 观察原代培养效果并用其核移植，探讨原代培养效果与囊胚发育率的关系。以组织块贴壁率、组织块发育率、组织 块的细胞贴壁率作为原代培养效果的衡量标准；传弘5代后进行核移植，分别统计囊胚发育率。结果表明：延边黄 牛腹部皮肤的生长效果明显好于耳部皮肤，并且囊胚发育率高于耳部皮肤。利木赞牛皮肤生长效果明显好于延边 黄牛和黑白花，延边黄牛与黑白花差异不显著。与之对应，利木赞囊胚发育率显著高于延边黄牛与黑白花，延边黄 牛与黑白花差异不显著。 关键词：原代培养；威纤维细胞；核移植；牛 中图分类号：$823．3 文献标识码：B 体细胞核移植技术在繁殖领域具有很大的生产 因此，本研究观察了不同品种同一部位及同一 潜力，但囊胚发育率低，制约着该技术投入实际生 品种不同部位的供核细胞原代培养效果，分别统计 产。囊胚发育率主要决定于供体细胞、受体细胞以 其重构胚囊胚发育率，并总结出培养效果对囊胚发 及后期培养条件3个方面fl_31。其中供体细胞的质量育的影响，以期为生产提供理论依据。 是制约囊胚发育的重要因素。有研究表明，同一品 1材料与方法 种动物不同类型的供核细胞的囊胚发育率是不同 1．1 实验材料本实验所采用的药品，除特殊说明 的。这可能是不同类型的细胞在细胞周期不同阶段 外均购自Sigma公司。主要试剂有DMEM、胎牛血清 的数目差异很大所致…。而有关不同品种同一部位 及同一品种不同部位的供核细胞在囊胚发育率方面 的差异尚未见报道。 子霉素、细胞松弛素(CB)、6一二甲基嘌呤 收稿日期：2009-0i—16；修回日期：2009-05—12 (6一DMAP)、透明质酸酶、谷胱甘肽(GSH)等。 1．2供核细胞的原代培养将牛耳部或腹部组织 苎鲁要旦：篓登磊j望彗当磐翟j发改高毪甲12057号’；延 边州延边大学合作项目(延大科合字(2005)06号) …～……．…：，…：…’ “’．一“……。。：■7．。 作者简孬：孙菇林(198l一)，男。吉林吉林人，硕士研究生 块经消毒处理后吲剪成lcm3的小块，用PBS清洗小 ·通讯作者 块数次，将组织块放人消化液(0．25％胰蛋白酶+ a1．InvolvementofaNa+／ I F，EdwardsJ。et bovine 【4】DemetreoA，Espinosa spe,rnatozoa(J1．BiolReprod，2003，69：177-185． inInoil84e Boil Yao W ofHicularfluidOn HCOfcotransportersperm Chem， Y，Ho S．Effectofhuman