生物质谱技术原理及应用03271.pptVIP

蛋白质与核酸相互作用鉴定 蛋白高级结构及蛋白-配体复合物研究 生物大分子的分子量分析 BSA 某蛋白聚合体 有机小分子研究 数据库检索 Mascot 2.3 结合Mascot Deamon有哪些信誉好的足球投注网站引擎 ProteinPilot 4.0 蛋白分析工具 一级图谱 二级图谱 MALDI 源生物质谱 MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解吸电离离子源（MALDI） 飞行时间质量分析器（TOF） Sample Inlet Ionization Mass Analyzer Mass Sorting (filtering) Ion Detector Detection Ion Source Sample/Matrix dried on MALDI Plate (Autoloader Cassette) Detect ions Forms ions (charged molecules) Sort Ions by Mass (m/z) Basic Components of a Mass Spectrometer Data Processing Vacuum Envelope Relative Abundance m/z 1000 2000 Mass Spectrum Data System MALDI 离子源 待测物质的溶液与基质的溶液混合后蒸发，使分析物与基质成为晶体或半晶体，用一定波长的脉冲式激光（337nm的氮激光）进行照射时，基质分子能有效的吸收激光的能量，使基质分子和样品分子进入气相并得到电离。 MALDI 基质应具有的特性 能够嵌入样品分子间并能起到隔离样品分子之间的相互作用(如形成共结晶); 能溶解于可溶解样品分子的溶剂; 在真空状态下是稳定的; 可吸收激光,既与激光形成共振吸收; 可激发样品分子离子化. 常用的 MALDI 基质 Matrix Application 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) 2,5-二羟基苯甲酸 Small molecules, small peptides, nucleotides, oligonucleotides, oligosaccharides 3,5-Dimethoxy-4-hydroxycinnamic acid (SA) 3,5-二甲氧基－４－羟基肉硅酸(反式)　 Large peptides, whole proteins, glycoproteins, lipids a-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (CHCA) Α－腈基－４－羟基肉硅酸 Peptides, proteins, lipids, nucleotides 是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比 (m/z) 与离子的飞行时间成正比。 反射飞行时间质量检测器 飞行时间分析器 TOF-TOF MALDI-TOF/TOF MALDI 源可以电离分子质量为102～106 Da 的生物分子并用于质谱分析。MALDI产生的离子采用飞行时间（TOF）检测器来检测，因此适用于蛋白质、多肽、核酸和多糖等生物大分子的测定。 通过第一级TOF选择特定多肽和蛋白，而后送入碰撞池进行裂解，再进入第二级TOF进行序列和修饰等结构解析，完成蛋白质的精确鉴定。 根据测定蛋白质酶解后的肽质量指纹图谱、肽序列标签以及一级质谱（MS）结合串联质谱（MS/MS）法去检索核酸或蛋白质序列库，可达到对蛋白质的快速鉴定和高通量筛选。 LC MALDI TOF/TOF分析与AB SCIEX TOF/TOF? 5800 系统 5800 MALDI TOF/TOF 串联飞行时间质谱主机 Tempo LC MALDI 点样系统 Mascot 2.3 结合Mascot Deamon有哪些信誉好的足球投注网站引擎 ProteinPilot 4.0 蛋白分析工具 Tempo LC MALDI 点样系统 MALDI 的特点 图谱相对简单; 激光具有一定的频率，和TOF完美匹配; 理论上待测物没有分子量范围限制; 样本消耗量极小(0.5 μL); 样本点靶后可多次分析; 一次实验可迅速完成多个不同样本的分析，高通量; 缺点 质荷比500-800区域噪音较大； 和液相色谱在线连接使用较为困难 可以吸收激光能量发生变化的分子不适用MALDI 优点 基于凝胶分离的蛋白质点或者条带的鉴定 (2-DE,DIGE,Co-IP, GST pull down...) 运用质谱进行定量的蛋白质组分析技术 (iTRAQ,SILAC,ICAT...) 生物大分子的分子量分析 蛋白质的序列分析，肽段的