第八章 液相色谱课件.pptVIP

一、液-固色谱固定相 二、 液－液色谱固定相 三、 离子交换剂固定相 四、凝胶色谱固定相 第四节 高效液相色谱固定相 是以硅胶为基体的各种类型的硅珠。主要有全多孔微粒型硅珠、多孔层硅珠和堆积型硅珠。 1、全多孔硅珠，最初使用的是粒度30～70μm的全多孔硅珠，比表面积大约100～400m2/g。 优点：孔径大而深，粒度大，易于装柱；比表面积大、柱容量大，允许较大进样量；制作工艺简单，成本也低。 缺点：孔径深，传质阻力大，柱效不高。 现在多用粒度为5～10μm的全多孔微粒型硅珠，在柱效或柱容量方面都有大大提高。 一、液-固色谱固定相 2、多孔层硅珠： 也称表面多孔硅珠或薄壳硅珠。它是在粒度为30～50μm的硅珠表面上，覆盖一层多孔性基质，厚度为1～2μm。 优点：孔浅，传质阻力小，柱效较高；流动性好，可用于干法装柱。 缺点：比表面积小，只有1～20m2/g，样品容量小，易发生过载现象。只适用于高灵敏度检测器。 液-固色谱固定相 3、堆积型硅珠：将颗粒极细的硅珠经一定工艺，凝聚成5～10μm的堆积硅珠。 优点：粒度分布窄、粒径接近，比表面积大，柱渗透性小，柱效高，压力低。 缺点：制造工艺复杂，价格昂贵。 微粒型全多孔硅珠和堆积型硅珠具有传质快，柱效高，容量大的优点，已成为液－固色谱常用的固定相，普遍取代了多孔层硅珠。 液-固色谱固定相 不同土壤，不同磷源 30 m m 二、 液－液色谱固定相 主要为化学键合固定相。以硅珠为基质，利用硅珠表面的硅醇基团与键合基反应加工而成。 优点是： 1、在表面键合了有机物基团，消除了表面的吸附活性点，使表面更均一。 2、可以通过改变键合不同的有机分子基团来改变选择性。 3.?柱效高，固定液不流失，提高了柱子的稳定性和使用寿命。 4.由于牢固的化学键，能耐各种溶剂，有利于梯度淋洗和样品的回收。 三、 离子交换剂固定相 离子交换剂固定相的基质有两种类型：一种是以硅胶微球；另一类是苯乙烯与二乙烯基苯的共聚物。 强酸性阳离子交换树脂的交换基为磺酸基，弱酸性的羧基。 强碱性的阴离子交换树脂基为季铵盐，弱碱性的为-NH(R)2CI。 主要类型：薄壳玻珠～苯磺酸、薄壳玻珠～乙基苯磺酸、薄壳玻珠～丙氨基丙酸、堆积硅珠～丙氨基丙酸、薄壳玻珠～丙基苄基二甲胺氯等。 按化学类型可分为软性，半软性，刚性凝胶。 软性凝胶在高的流速下会被压缩，并会从柱末端挤压出来，只适用于低流速的液相色谱。 半软性凝胶可用于高效液相色谱，但压力不能超过150kg/cm2。 刚性凝胶为多孔硅胶，它们近于纯的SiO2, 其孔径按不同方法形成。多孔硅胶表面上有酸性基团，能与某些样品作用，需进行表面处理。 四、凝胶色谱固定相 在液相色谱中，许多溶剂都可用作流动相。 第五节、液相色谱流动相 一、对流动相的要求 1.对色谱柱、固定相和分离组分要有惰性。 2.对样品有较大的溶解度。 3.对所选用的检测器没有干扰。 4.粘度小。 5.纯度高，成本低，容易清洗，沸点合适， 以利于回收分离样品。 6.毒性要小，稳定性要好。 * 第八章 高效液相色谱法 第一节 高效液相色谱法简介 第二节 高效液相色谱的类型 第三节 高效液相色谱仪 第四节 高效液相色谱固定相 第五节 液相色谱流动相 第六节 高效液相色谱检测器 第八章 高效液相色谱法 第一节 高效液相色谱法简介 高效液相色谱法是1964～1965年开始发展起来的一项新颖快速的分离分析技术。 它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器后，发展成为高分离速度、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法。也称现代液相色谱法。 概述： 共同点： 高效液相色谱是在气相色谱高速发展的情况下发展起来的，它们之间在理论上和技术上有许多共同点。 （1）色谱的基本理论是一致的； （2）定性定量原理完全一样； （3）均可应用计算机控制色谱操作条件和色谱数据的处理程序，自动化程度高。 液相色谱和气相色谱的异同点： 1.流动相差别 2.固定相差别 3.使用范围更广 4.在原理和结构方面有差异 因液相色谱的流动相是液体，其粘度比气体大100倍以上，扩散系数比气体小102～105倍；因此溶质分子与液体流动相之间的作用力不能忽略，致使液相色谱与气相色谱有以下的差别： 二者的差异： 液相与气相差异 流动相：气相色谱为气体、液相色谱为液体。 以液体作流动相，液体分子与样品分子间的作用力不能忽略；液体种类多，性质差别大，水溶液或有机溶剂