未知肠道杆菌的分离鉴定程序.ppt

标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序 直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 （凝固酶、耐热核酸酶） 设计性实验 临床标本中病原菌的分离与鉴定 设计性实验 1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等 3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 培养基原理 1. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基） 组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理： 细菌 乳糖 产酸：伊红＋美蓝 紫黑/紫红 结果： 分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色） 2. 靛基质试验（吲哚试验） 组成：蛋白胨水＋色氨酸 原理： 分解 某些细菌有色氨酸酶 色氨酸 吲哚（无色）＋柯氏 试剂 玫瑰吲哚（红色） 结果：液面形成玫瑰红色 吲哚试验 3. 克氏双糖铁斜面培养基反应试验 组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂 原理： 只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少） 分解葡萄糖＋乳糖 产酸（乳糖多，产酸多） 上下层均为黄色 产生H2S＋铁盐 FeS 培养基成黑色 Double suger iron slant 4. 尿素培养基 组成：基础培基＋尿素＋酚红 底物 指示剂 原理： 有些细菌产生尿素酶 分解尿素 产氨 结果： 分解尿素 培基变红 不分解尿素 培基不变色 1 2 3 4 5 6 NS（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (1:10) 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 菌液(摇匀) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (4种，1种/人) 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 (阴性对照) 37℃水浴过夜 肥达试验 H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底 O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示 ＋＋＋＋ 上清完全透明，细菌全部形成凝集块 ＋＋＋ 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 ＋＋ 50％细菌形成凝集，液体半澄清 ＋ 仅少数细菌凝集，液体比较混浊 － 液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐） 以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价