2015版中国药典微生物限度要点.ppt

微生物限度检查法 《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 3、非无菌药品微生物限度标准 1.非无菌产品微生物限度检查：----微生物计数法 1.1 总则：环境、要求 1.2 计数方法：平皿法、薄膜过滤法、最可能数法（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基 1.1 总则： 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。 1.1 总则： 环境： 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内】。 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 1.1 总则： 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。 1.2计数方法： 平皿法 薄膜过滤法 最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN 法）。 MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方法。 供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，所选的方法必须具备检测充足样品量的能力，以保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验【10版：方法验证】， 以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时， 计数方法应重新进行适用性试验。 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验 1.3.1菌液制备及使用 1.3.2计数培养基适用性检查 1.3.3计数方法适用性试验 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验 1.3.1菌液制备及使用 菌种? 试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 1.3.1菌液制备及使用 1.3.2计数培养基适用性检查【10版】 1.3.2计数培养基适用性检查【15版】 1.3.3计数方法适用性试验 供试液制备 接种和稀释 抗菌活性的去除与灭活 供试品中微生物的回收 平皿法 薄膜过滤法 最可能数法（MPN 法） 结果判断 1.4 供试品检查 1.4.1检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或cm2 ）。 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或10ml；膜剂为100cm2 ；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。检验时,应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品,大蜜丸还不得少于4 丸,膜剂还不得少于4 片。 一般应随机抽取供试品，取规定容器数，混合，取规定量供试品进行检验。 1.4.2供试品检查 按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数； 沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。 阴性对照试验? 以稀释剂代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 1.4.2供试品检查 供试液制备 根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不应超过 45℃。供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过 1小时。 常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。 1.4.2供试品检查 供试液制备 ⑴ 水溶性供试品 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2 磷酸