实验室HBVDNA定量检测临床意义_北京大学.pptVIP

*;沈 弢 北京大学 病原生物学系 taoshen@hsc.pku.edu.cn;核心电子器件、高端通用芯片及基础软件新产品;Hepatology, 2009 J Hepatol, 2012;超敏感（Hypersensitivity） —乙肝检测灵敏度应达到10-15IU/ml，丙肝检测灵敏度达到50IU/ml，从而帮助医生确定治疗终点，同时及时监测耐药的发生。 宽线性范围（ wider dynamic range ） —试剂盒线性定量范围应为1-9log10IU/ml，以帮助医生准确测定病毒感染的基线水平，并有效评估抗病毒治疗的效果，为患者提供最优治疗方案。 高特异性（ High specificity） —试剂盒应能够检测肝病毒各基因亚型，有效避免假阴性及漏检情况的发生。 可重复性好（ Repeatability） —试剂盒操作过程要简单，以最大程度上减少操作误差，同时检测结果的重复性要好，以保证肝病治疗过程中监测指标的准确性和有效性。;我国曾是世界上HBV感染流行最高的地区之一;;（一） 慢性乙型肝炎 ???二） 乙型肝炎肝硬化 （三） 携带者 （四） 隐匿性慢性乙型肝炎 ;临床诊断 临床症状、疾病史 实验室诊断 生化学检查 HBV血清学检测（抗原/抗体系统） HBV DNA（基因型、亚型和变异检测） 病理学诊断 影像学诊断 ;慢性HBV感染临床诊断;;;慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标 ;慢性乙型肝炎的诊断 开展抗病毒治疗的重要指标：　　　 HBeAg阳性慢乙肝患者：HBV DNA ≥20 000 IU/mL，伴有肝脏损伤者 (ALT升高，或肝活检发现肝脏炎症)； HBeAg阴性慢乙肝患者：HBV DNA ≥2 000 IU/mL伴有肝脏损伤指标，即应开始抗病毒治疗。 代偿期肝硬化患者：HBV DNA +;HBV DNA的定量检测已经成为临床治疗的关键指标;例如：HBV DNA载量检测在治疗优化路线图中的作用;例如：HBV DNA载量检测在治疗优化路线图中的作用;HBV DNA的定量检测已经成为临床治疗的关键指标;;原因分析;国内现有核酸检测技术流程;PCR体系配置，核酸提取，荧光PCR检测。 一站式全自动检测！;国产乙肝病毒DNA定量试剂质量的提高需向系统（试剂+体系）转换;对策1：技术进步，全自动的核酸提取设 备+基于开放设备的定量试剂 √ 对策2：通过行政手段淘汰劣质试剂； √ 对策3：由维价格论→综合考虑质量与价格√ ;我们已经完成配合自动化仪器的磁珠核酸提取试剂，达到国外先进水平。;圣湘公司自主研发的核酸提取试剂（磁珠法），实现了DNA/RNA共提取。效果等效于国外著名同类试剂。 HBV灵敏度可达10IU/ml，HCV灵敏度达20IU/ml。;磁珠核酸提取试剂可在各种不同仪器上进行下游检测;*;定量检测HBV感染者血浆 (清) HBV DNA是了解肝内HBV复制水平的可靠指标，也是HBV感染诊断、疗效监控和指导用药的重要指标。 近年，国产试剂的质量得到很大改进，但多数试剂的灵敏度、准确性及重复性等与进口优质试剂相比，仍存在较大差距。尤其对低病毒载量或存在干扰物质的临床标本进行检测时，差距更为明显。 目前我国市场上主流的国产HBV DNA定量试剂盒多是基于即将废除的煮沸法核酸提取方法，检测下限一般为500~1000 IU/ml，不能满足临床诊断的需求。 在国家“十二.五”传染病防治重大专项“乙型病毒性肝炎临床诊断及监测技术的研究”的支持下，基于磁珠法核酸提取的国产HBV DNA定量试剂盒已成为主流研发方向。; 对国产湖南圣湘乙型肝炎病毒核酸定量检测（PCR-荧光探针法）试剂盒的可溯源性、准确度、精密度和临床应用进行质量考评。;用基于磁珠法自动化核酸提取平台的该国产HBV DNA定量试剂盒和罗氏HBV DNA定量试剂盒对WHO的 HBV DNA系列稀释标准品 (50、200、2000、20 000 IU/ml) 进行溯源性分析，确定试剂盒检测的可靠性。 用这2种试剂盒对HBV B和C基因型标准血浆 (分别稀释为25、50、200、2 000、20 000、200 000 IU/ml) 分别在三个不同检测中心共进行216次平行检测，比较其准确度和精密度。 用2种方法平行检测5份HBV DNA阴性血浆样本和37份不同病毒载量的HBV DNA阳性临床血浆标本，并评价其相关性和符合率。;*;*;*;*;*;*;*;;*;*;*;*;*;*;*;*;*