最全的液相色谱知识整理教程.doc

最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法） HPLC日常维护- 进样阀问题可能原因解决方法手动进样阀，转动不灵转子密封损坏更换或调整转子密封转子太紧调整转子的松紧度手动进样阀，载样困难 进样阀安装不当重新安装定量环阻塞清洗或更换定量环进样器污染清洗或更换进样器管路阻塞清洗或更换管路自动进样阀，不能转动无压力（或电源）提供恰当的压力（电源）转子太紧调整转子的松紧度进样阀安装不当重新安装自动进样阀，其它问题阻塞清洗或更换阻塞部件机械故障见随机维修手册控制器故障维修或更换控制器 出现问题可能原因解决方法保留时间变化柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱 等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱缓冲液容量不够用25mmol/L的缓冲液柱污染每天冲洗柱柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相柱快达到寿命采用保护柱 保留时间缩短流速增加检查泵,重新设定流速样品超载降低样品量键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀温度增加柱恒温保留时间延长流速下降管路泄漏,换泵密封圈,排除泵内气泡硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀温度降低柱恒温出现肩峰或分叉样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品进样器损坏更换进样器转子鬼峰进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗样品中未知物处理样品柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水基线噪声气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂检测器灯连续噪声更换氘灯电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压峰拖尾柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相峰干扰清洁样品,调整流动相硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的 浓度降低流动相PH值,钝化样品柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 峰展宽进样体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相 检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至最小样品过载 进小浓度小体积样品 流动相 a、流动相对样品具有一定的溶解能力 b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。 c、流动相的黏度要尽量小 d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应 e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。 1.流动相必须用HPLC级的试剂. 2.流动相过滤后要用超声波脱气.脱气后应该恢复到湿温后使用. 3.长时间不使用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存. 4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器. 流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶； 流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。 对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。 对于内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min