4.第三章消毒与灭菌1.ppt.ppt

第三章 消毒与灭菌;消毒：应用物理或化学方法杀灭物体中的病原微生物，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。 灭菌：应用物理或化学方法杀灭物体中所有的病原微生物、非病原微生物及其芽胞、孢子的方法。 消毒只要求达到无传染性的目的，对非病原微生物及其芽胞、孢子并不要求全部杀死。;防腐：应用各种化学药品或物理方法防止或抑制微生物生长繁殖的方法。 无菌法：采取防止或杜绝一切细菌进入动物机体或其他物体的方法。 以无菌法进行的操作称无菌操作。 滤过除菌：指液体或气体通过滤过作用除去其中所存在的细菌。 ;第一节 物理因素对微生物的影响;一、温度对细菌的影响 按细菌对温度的适应可分为： 嗜冷菌、嗜温菌、嗜热菌 按温度对细菌的影响有： 最适温度、最高温度、最低温度;1. 低温对细菌的影响 大多数微生物对低温具有很强的抵抗力. 环境温度最低生长温度：代谢活动降低，最后生长繁殖停滞，存活较长时间。 一般细菌菌种在冰箱5-10℃低温下保存。但也有些细菌对低温持别敏感，在冰箱内保存比在室温下保存死亡更快。如禽多杀性巴氏杆菌。;冷冻干燥法：将保存物置玻璃容器内，在冷冻真空干燥器中迅速冷冻，然后抽去容器内的空气，使冷冻物中的水分在真空下直接升华而逐渐干燥，最后在真空下将玻璃容器焊封严密。在这样的冻干状态下，细菌及生物制剂可保存数月至数年而不丧失其活力。 冷冻干燥(冻干)法是保存菌种、疫苗等良好方法。;补充：为什么冷冻保存细菌时，温度必须迅速降低?;补充：反复冻融对微生物活力的影响;2. 高温对细菌的影响 高温对细菌有明显的致死作用，是最常用的有效的灭菌方法。 其原理多认为热力使菌体蛋白质变性或凝固，酶失去活性，导致细菌死亡。 ;干热灭菌法(火焰灭菌和热空气灭菌） ①火焰灭菌法 主要用于接种针、接种环、试管口等的灭菌。 ②热空气灭菌法　用加热空气使灭菌物品温度升高到160℃并维持1～2小时以进行灭菌的方法。主要用于干燥的玻璃器皿如试管、吸管、玻璃注射器、培养皿等的灭菌。;干热灭菌注意事项： 1.灭菌结束后，切记不可立即打开箱门，以免着火； 2.灭菌物品不要堆放太紧，以免升温不均匀； 3.灭菌时，要使温度逐渐上升，切忌太快。以免造成玻璃器皿的炸裂； 4.不能耐受160 ℃高温的物品切勿干热灭菌。;湿热灭菌法： 1. 煮沸灭菌 10-20min杀死所有细菌繁殖体；加入1%碳酸钠或2-5%石炭酸，灭菌的效果更好。;2. 巴氏消毒法 用于葡萄酒、啤酒及牛乳等的消毒(不损失营养成分）。 低温维持巴氏消毒法：61-63℃（63-65），30min，然后迅速冷却至10℃左右。 高温瞬时巴氏消毒法： 71-72℃，15s，然后迅速冷却至10℃左右。 超高温巴氏消毒法：使鲜牛奶通过温度不低于132℃的管道1-2s，然后迅速冷却至10℃左右(在常温下的保存期可达半年）。;3.流通蒸汽灭菌法 100℃的蒸汽维持30min (不能杀死芽胞） 4.高压蒸汽灭菌 在一个加有少量水的密闭的金属容器内，通过加热来加大蒸汽压力，以提高温度，达到在短时间内完全灭菌的效果。;①高压蒸汽灭菌时压力与温度的关系 10磅(磅/平方英寸），115 ℃ ， 15磅，121 ℃ ， 20磅，126 ℃ 。 ;②高压蒸汽灭菌的适用范围 适用于培养基、生理盐水、某些缓冲液、针剂、玻璃器皿、金属器械、工作服等。 血清、血液、酶、氨基酸等，只能采用过滤除菌的方法。 糖类溶液或含糖的培养基可用10磅15~20min灭菌，若压力、温度过高则可使培养基颜色变深。 ;③高压蒸汽灭菌时注意事项 排冷空气 灭菌前要检查灭菌器内水位是否正常。 灭菌物品不要互相挤压过紧，以保证蒸汽通畅，使所有物品的温度均匀上升。 不耐热的塑料等材料切勿高压灭菌。;高压蒸汽灭菌锅构造;1、加水至止水线； 2、灭菌物品包裹好； 3、开启放气阀； 4、加热排气； 5、达到预定表压，开始计时； 6、关闭热源，当压力降至0.05MPa时，缓慢开启放气阀。;补充：温度敏感诱变育种;热力灭菌法;二、光线对细菌的影响 可见光线的影响 ：肉眼可见的光线对细菌一般无多大影响。但长时间暴露于光线之中，则细菌的代谢与繁殖亦可受到影响。故培养细菌及保存菌种，均应置于阴暗之处。; 日光是有效的天然杀菌因素。 如细菌在直射日光下照射半小时到数小时以上即可死亡，芽胞对日光照射的抵抗力比繁殖体大得多，往往需经20小时才能死亡。 阳光暴晒消毒 在实践中，日光对被污染的土壤、牧场、畜舍垫料及用具等的消毒均具有重要意义。;⑴光感作用(Photosensitization) 将某些荧光染料如美蓝、伊红、汞溴红、沙黄等加入培养基中，能增强可见光线的杀菌作用，这种现象称为光感作用。 ⑵光复活作用(Photoreacti