人PSF真核表达载体构建及其在CHO细胞中的表达.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 贵州大学学报 ?自然科学 版?? ???．?????．?? ????年 ?月? ???????????????????????????????????????????????? ???．????? 文章编号 ????— ????????????— ????— ??? 人 ???真 核 表 达 载体 构 建及 其在 ??? 细 胞 中的表 达? 易卉玲 ，许晓利 ，叶雁杰 ，柳? 威 ，舒细记? ?江汉大学医学院 ，湖北 武汉 ???????? 摘 要 ：目的是构建人 ???基 因真核表达载体 ?????—??????，并在检测其在 ???细胞株 中的表? 达 情况 。应 用 ???重组技 术 和 ??? 方 法从 人 宫 颈癌 ????细 胞 中扩 增 ???基 因 ，插 入 ?????—? ??真核表达载体，构建重组质粒 ?????．??一???并测序鉴定。将 ?????．??一???瞬时转染 ???? 细胞 ，通过 ????????????和 ??．???方法检测 ???的表达 ，荧光显微镜下观察绿 色荧光蛋 白表达。? 结果 ???细胞转染 ????????????真核表达载体后 ，??—???和 ????????????实验发现 ，在 ???? 和蛋 白水平有 ???的表达，在荧光显微镜下可以观察到融合蛋 白 ????／???的表达。成功构建? ?????—??一???真核 表 达载体 ，证 实其在 ???细胞 中可 以表 达 。? 关键词 ：人 ???蛋白；?????—??；真核表达载体 ；融合蛋白? 中图分类 号 ：???? 文献标 识 码 ：?? 多嘧 啶序 列 结合 蛋 白相 关 剪接 因子 ?????????—? 公 司 ，抗 鼠二 抗购 自 ???公 司 ，???曝 光 底 物购 自? ????????????????????????????·????????????????????????·? 碧 云 天公 司 ，曝光 底 片 ??????????，????购 自 ???—? ???，????，分 子 量 ???????，与 多 嘧 啶 序 列 ?????—? ??公 司 。? ????????????????????????????????，????结合成 为剪? ?．? 引物设计? 接复 合 体 ???，参 与 前 体 ???? 的 剪 接 加 工???。? 参照 ???????上 ???核苷酸序列设计引物如? ????????质粒 是 能 够 表 达 绿 色 荧 光 蛋 白的 真 核? 下 ：上 游 ：?’???????????????????????????? 表达质粒 ，本实验拟在 ?????—??的多克 隆位点插? ?????????一?’，下 游 ：?’??????????????????? 入 ???全 长 片段 ，从 而 构 建 能 够 与 绿 色 荧 光 蛋 白? ?????????????????’，上下 游 引物两 端 分别 加 入? 融合 表达 的 重组 质 粒 ?????—??．???，为 进 一 步研? ???????和 ?????酶切位点 。??????