EVOSFLAuto细胞成像系统定量检测细胞增殖.PDF

应用指南 EVOS FL Auto 细胞成像系统 EVOS FL Auto细胞成像系统 定量检测细胞增殖 应用简介 EVOS? FL Auto细胞成像系统是一款 全自动的倒置多通道落射荧光和透射 光数字成像系统，具有极佳的流程效 率，该系统旨在满足广泛应用领域的 各种高要求，支持高分辨率图像无缝 拼接、自动化多位置多孔板扫描、自 动细胞计数和延时成像实验等。 通用的软件功能之一是细胞计数，可以通过捕获图像或实时成像自动完成。功 材料 能强大的分水岭算法(Watershed Algorithm)提高了采用ReadyProbes? NucBlue? ? Image-iT?细胞染料固定/透化试剂盒 活细胞或固定细胞染料染色的细胞计数的精确度。采用其他核染料/荧光蛋白或 (R37602) 通用的细胞质荧光染料/蛋白，可以轻松测定总细胞数和/或染色细胞的百分比 ? Click-iT? EdU Alexa Fluor? 594成像 (功能读数)。 试剂盒(C10339) 在本应用中，我们分析正在进行复制细胞的数量占总细胞群的百分比。采用 ? NucBlue?固定细胞染料(R37606) EdU-Alexa Fluor? 594标记增殖细胞，用NucBlue?固定细胞染料识别总细胞， ? EVOS?光立方，DAPI (AMEP4650) 可轻松确定增殖细胞的百分比。 ? EVOS?光立方，Texas Red? (AMEP4655) 实验方法 用EdU处理96孔板培养的HeLa细胞1小时，然后采用 Image-iT?固定/透化试剂盒固定、透化并封闭细胞。固定 和透化后，加入2滴/ml NucBlue?固定细胞染料标记细胞 核，采用Alexa Fluor? 594叠氮检测进入细胞的EdU。含有 EdU的细胞显示为粉色，所有细胞的细胞核均标记为蓝色 (图1)。样本制备好后，在EVOS? FL Auto细胞成像系统上 进行细胞成像，采用EVOS? DAPI光立方观察NucBlue?固 定细胞染料，采用EVOS? Texas Red?光立方观察Click-iT? EdU (10x物镜)。在EVOS? FL Auto细胞成像系统上采用细 胞计数功能的标签页进行细胞定量。 图1. HeLa细胞增殖定量分析中采用的10x叠加图像。 结果和讨论 采用NucBlue?固定细胞染色计数DAPI通道中的细胞数，测 定总细胞群为373个细胞(图2)。计数Texas Red?通道中的 Click-iT? EdU阳性细胞的细胞数，测定该细胞群中增殖细胞 数为138个(图3)。根据上述结果，该细胞群中37% (138/373) 的细胞具有增殖活性。采用EVOS? FL Auto细胞成像系统， 研究人员可以将定性图像与定量检测相结合，提供适合研究 应用的丰富数据。 图2. 图像中总细胞群(蓝色)定量的屏幕截图。在该视野中共计373