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如何对新城疫开展免疫监测 近年来，我国家禽规模化、集约化和标准化饲养发展迅速，而传统的农村散养模式所占比例越来越少，这是我国养禽业向现代化健康稳定发展的大趋势。在集约化养鸡企业的兽医卫生和疾病防控工作中，实验室检测的作用日益突出，有规模的种鸡场或商品鸡场，在科学免疫的同时，都应定期对鸡群进行免疫监测，这是鸡场生产成功的重要保障。 1?病原 新城疫（ND）是由禽副流感病毒Ⅰ型新城疫病毒（NDV）引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性、致死性疾病。NDV对鸡的感染率和致死率均颇高，是最重要的一种家禽传染病。NDV不易变异，只有一个血清型，属于副粘病毒科副粘病毒属的Ⅰ型副粘病毒（PMV-Ⅰ），病毒有囊膜，囊膜有两种纤突，即血凝素和神经氨酸酶，能凝集多种动物的红细胞。 尽管已有不少的实验室方法可用于ND的血清学诊断，例如，病毒中和试验、ELISA试验、琼脂双扩散试验、神经氨酸酶抑制试验等。但迄今为止，血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）仍不失为一种快速准确的传统实验室手段。 2?实验材料 2.1 参考血清 实验中的NDV阳性参考血清可用6~9周龄的SPF鸡制造。腿部肌肉注射0.1ml具感染性的低毒力尿囊液，同时滴鼻0.1ml，两周后重复一次，再过3周以后采血提取阳性血清。 2.2 抗原 ND-HI抗原是采用经适当稀释的具有感染性的尿囊液，在实际工作中常用0.1%甲醛灭活的病毒液。F株已被指定为NDV的国际参考株，但通常多用LaSota株代替比较方便。根据经验，LaSota血凝抗原HA效价以＞10log2为佳。目前青岛易邦、中检所和哈兽研均有商品化试剂出售。 2.3 1%红细胞液 应自SPF或无抗体鸡采得。采用翅静脉或心脏采血后放入有抗凝剂的离心管中，混匀后2000r/min，5~10min，吸去上清和白细胞膜，再加稀释液洗涤，如此反复3~4次，将最后一次离心的红细胞泥按1%的稀释度加入稀释液。 3?方法 HA和HI试验已推广β-微量法，在96孔反应板上进行。目前，常见样品反应量为25、30和50微升，其结果基本无差异。对所有副粘病毒的各血清型，未免疫或未被感染的禽，其HI效价通常低于1:8。大多数禽血清，高于这个水平的非特异性效价是极少见的。 4?影响结果的因素 4.1 红细胞悬液浓度 来源于不同个体鸡的红细胞，对抗原的敏感性不尽相同。因此实验时最好用3~4只未免疫鸡。 4.2 抗原的稀释倍数 配制抗原时，浓度必须准确。当抗原浓度高时， HI抗体效价就下降；当抗原浓度低时，HI抗体效价就上升。 4.3 实验用的稀释液 稀释液的pH值对实验有影响。稀释液的pH值5.8以下，红细胞容易产生自凝现象；pH值在7.8以上凝集图形易消失，也会造成实验误差。而pH值为7.0时，红细胞沉降最充分，图形最清晰，HI效价也最高，因此实验时用pH7.0~7.2的稀释液。目前多用磷酸缓冲液（PBS）。 4.4 实验时的温度 实验时的温度，从4~37℃，随着温度上升，HA与HI滴度提高，但在37℃时，凝集的红细胞易洗脱；4℃以下红细胞易产生自凝，故操作常用20~22℃。 4.5 实验的作用时间 一般以30~45min为宜，CP集团统一为30min。 4.6 其他 人为因素、操作程序因素、器具的洁净与否等都会对检测结果有影响。不同实验室间对于同一批次样品的检测数据不宜做横向比较，但对同一鸡场样品的检测结果的纵向趋势应相似。 5?检测频率及采样数量 对于健康鸡群可每四周检测一次，对于发病的鸡群，可采集发病后7~10天的样品进行检测。可以按每个舍0.6%的比例采样，但每舍不得少于15份，常规采样20~30份即可。 6?检测时机 6.1 1d ：检测母源抗体，考察种代健康情况及确定免疫时间。 6.2 肉鸡：35~42日龄，测定出栏前机体抗体情况。 6.3 种鸡/蛋鸡：每4周一次。 6.4 免疫试验或疫苗对比试验：每周采血化验。 7?采样的具体要求 采样应注意样品数量与质量，既保证时间连续性，又要兼顾阶段连续性。 7.1 每个鸡舍应分至少五个点随机采样。采血的量要适当，一般在1~1.2ml左右(4/5管)为宜。如果采血量不足，可能不够完成所有的化验项目。 7.2 采血时采出的血液应沿着采血管管壁慢慢注入管内，切忌用力过猛起泡造成溶血。 7.3 刚采好的血要避免受冷和振动，应在25~37℃环境中加盖静置1~2h，这样有利于血液凝固和析出血清。静置后立即送检，如不能及时送检。须放入4℃冰箱保存（不要超过24h），切忌冰冻。 7.4 血样运输时尽可能直立，避免洒漏。 8?采样方法 8.1 心脏采血（适用于刚出壳到两周内的小鸡） 一般用前胸口进针采血，具体方法：用左手固定使鸡仰卧,胸骨嵴朝上，用手指将嗉囊及其内容物压离局部,暴露出胸前口，将针头由前胸口顺