免疫学检测上课11教程.ppt

免疫学的临床应用;提要;免疫学检测 ;（一）抗原抗体反应的原理;;应 用;2、利用已知抗体检测未知抗原;（二） 抗原或抗体的检测类型 ; （一）凝集反应（agglutination）;（1）、直接凝集反应： 将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。 （2）、间接凝集反应： 将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。;乳胶颗粒;１、直接凝集反应： 玻片法：已知Ab?Ag（血型，细菌鉴定）举例 试管法：已知Ag?Ab（血清抗体效价） ２、间接凝集反应：可溶性抗原＋载体颗粒→致敏颗粒?凝集;玻片法举例;（二）沉淀反应（precipitation）;(1)、单向免疫扩散;（2）、双向免疫扩散 ;3、免疫标记技术;（1）、免疫荧光显微技术;（2）、酶免疫测定(Enzyme Immunoassay, EIA);酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA);（1）酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡenzyme-linked immunosorbent assay)原理： 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面 酶标记抗体或抗抗体+抗原+底物 显色深浅反映标本中抗原或抗体; ELISA 检测抗体;;双抗夹心法;（3）、放射免疫测定法(Radioimmunoassay, RIA);二、 淋巴细胞 的测定 ;（一）、免疫细胞数量检测;花结试验示意图;（二）、免疫细胞功能检测1、T细胞功能测定;淋巴细胞转化试验（形态学示意图）; ;第二节 免疫学防治;菌苗、疫苗（用细菌等微生物制成的制品）,分死、活疫苗;;; 一、人工主动免疫 1、 死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。 2、 减毒活疫苗：是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。 3、 类 毒 素：细菌外毒素经甲醛处理后，失去毒性而保留其免疫原性即为类毒素。常用的类毒素有破伤风类毒素、白喉类毒素等。;死疫苗和活疫苗的比较; 二、人工被动免疫 是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染疾病。人工被动免疫力维持的时间短，约2~3周。常用制剂有： 抗毒素 人免疫球蛋白制剂 细胞因子制剂 单抗/基因工程抗体;比较;人工主动免疫与人工被动免疫;免疫治疗(immunotherapy) ;;（一）免疫增强剂; 二、 免疫抑制剂; 免疫抑制药物的适应症和副作用;免疫重建;三、过继免疫;四、计划免疫; 用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性;直接荧光法;间接法 双抗夹心法 竞争法 E: 辣根过氧化酶 HRP S: 底物 二氨基联苯胺 DAB/邻苯胺;间接法;双抗夹心法; BAS-ELISA法（ biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系统-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗体以及DNA、RNA的检测。;;能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗HIV抗体的检测。; 二、淋巴细胞的测定;（1）间接免疫荧光法：鉴定细胞的群、亚群。;; ; （2）抗体形成细胞测定—— 溶血空斑试验 （hemolytic forming cell assay，HFC）计算HFU/ml; 可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等;4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验; ;（一）免疫增强剂; 二、 免疫抑制剂; 免疫抑制药物的适应症和副作用;抗体为基础的免疫治疗;LAK（lymphokine activated killer cells）细胞——淋巴因子活化的杀伤细胞。是将外周血淋巴细胞在体外经过IL-2培养后诱导产生的一种新型的杀伤细胞，具有更强的杀瘤特性。其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏且无MHC限制性。主要为NK细胞;疫苗 ——应用微生物制备的具有免疫原性的物质。包括灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊髓灰质