酸性磷酸酶染色液使用说明.pdf

酸性磷酸酶染色液使用说明 产品简介： 酸性磷酸酶（Acid phosphatase，ACP）分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞 的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各 种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜 pH 为 4.5-5.5。 酸性磷酸酶染色液以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性 pH 下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸 盐，遇到铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被 S2+置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸 酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+、酒石酸根离子和四 氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn2+为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰 冻切片。临床上，改染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应，霍奇金 淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应，Ewing 肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。 产品组成： 规格 名称 G1490 2×50ml Storage 试剂(A): ACP 孵育液 50ml 4℃ 避光 试剂(B): ACP 硫化液 2×1ml RT 避光 试剂(C): ACP 对照液 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1 份 自备材料： 蒸馏水、恒温箱、封片剂 操作步骤（仅供参考）： （一）冰冻切片染色 1、冰冻切片至蒸馏水。 2、切片入 ACP 孵育液，置于 37℃温箱，浸染 15-60min。 3、入 37℃蒸馏水中洗 2次，每次 1min，以去除未被吸附的铅。 4、在上述过程中配制 ALP 硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释 50 倍，即为 ALP 硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育 1-2min。 5、流水冲洗 3-5min，蒸馏水洗。 6、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。 7、甘油明胶封片。 （二）石蜡切片染色 1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。 2、切片入 ACP 孵育液，置于 37℃温箱，浸染 4-12h，可以延长至 24h。 3、入 37℃蒸馏水中洗 2次，每次 1min，以去除未被吸附的铅。 4、在上述过程中配制 ALP 硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释 50 倍，即为 ALP 硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育 1-2min。 5、流水冲洗 3-5min，蒸馏水洗。 6、（可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。 7、甘油明胶封片。 染色结果： 酶活性部位 黑素硫化铅沉淀 细胞核 根据复染液不同而不同 阴性对照：（可选） 将切片置于试剂（C）--ACP 对照液中，室温 1-2h 孵育，其余步骤相同，结果为阴性。 注意事项： 1、ACP 孵育液、ACP 硫化液易失效，最好分成小分储存。ACP 硫化液具有腐蚀性。 2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 3、样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。 4、组织固定需在 4℃冰箱进行，时间不宜超过 24h，否则酶活性会减弱或消失。 5、组织在石蜡包埋是，温度不宜高于 56℃。应使用熔点为 52-54℃的石蜡进行浸蜡， 浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。 6、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用 AR 级以上的二甲苯。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6 个月