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上海斯丹赛生物技术有限公司;靶向基因修饰;基因敲除的方法;锌指核糖核酸酶（ZFN） 20世纪末 DNA 识别域 (ZFP) + 非特异性核酸内切酶构成（FokI); TALE domain: DNA 识别域 TALE，植物病原体黄单胞菌 Xantomonas – 用于调控宿主基因 由34的氨基酸长度的重复单位构成 第12，13位点氨基酸（ repeat-variable di-residue，RVD）不同 RVD决定识别位点不同 Nuclease domain: DNA剪切域 FokI，发现于海床黄杆菌 Flavobacterium okeanokoites 采取其非特异性DNA剪切结构域 形成二聚体时发生剪切;TALEN切割双链;;构建TALEN质粒;TALEN的组装(Golden Gate);一步法连接;FastTALETM连接TALEN;多种TALEN骨架载体，满足不同物种需求;TALEN质粒构建流程;靶点设计;TALEN连接; 转化至感受态细胞 在Kana+ LB平板中培养;挑单克隆， 细菌培养;DNA质粒抽提，酶切鉴定;上游引物: 5’-CTCCCCTTCAGCTGGACAC-3’ 下游引物: 5’-AGCTGGGCCACGATTGAC-3’;测序结果比对;得到测序正确质粒;TALEN 的实际应用;应用实例1 细胞模型;脂质体转染入Hela细胞中；puromycin药物筛选3天;大于53%（每100个细胞中有53个细胞发生碱基突变）;*;Knock-in 载体构建;打靶示意图（基因敲入）;打靶示意图（定点突变）;打靶示意图（定点缺失）;打靶效率经验参考;打靶效率经验参考;成功实例2 动物模型—斑马鱼 ;应用实例3 动物模型——小鼠;应用实例3 动物模型——小鼠;应用 I: 基因敲除;应用 II：基因敲入;应用 III: 基因定点修复;应用Ⅳ : DNA水平的miRNA敲除;TALEN广泛应用; 斯丹赛部分成功案例; 斯丹赛部分成功案例; 斯丹赛部分成功案例; 斯丹赛部分成功案例;专业、完善的技术保障;TALEN在iPS领域的应用;用于iPS建立的体细胞来源 ;Oct4 Sox2 Klf4 C-myc;疾病模型—用于疾病机理研究;iPS细胞系定点修复;定点修复后的ips细胞系经定向分化得到正常细胞！;iPS细胞系定点修复;TALEN 的实际应用;技术革新推动科研进步;谢谢！