湖工酶工程第三章选编.ppt

第三章 酶的分离工程;第一节 预 处 理; 絮凝 利用高分子聚合物的桥联作用，将胶体粒子联结成网状絮凝团的过程。聚丙烯酰胺;二、细胞破碎;（二）物理破碎法;（四）酶促破碎法;第二节 酶的提取;（三）碱溶液提取法 pH 8~12 ;二、影响酶提取的主要因素;第三节 酶的分离纯化;一、离心分离;（二）离心分离方法;二、沉淀分离;（一）盐析沉淀法;I;（二）等电点沉淀法;注意：;（三）有机溶剂沉淀法;特点：;（四）选择性变性沉淀法;（五）其它沉淀方法;三、过滤与膜分离;（二）微滤和超滤;超滤膜要求：较大的透过速率和较好的选择性；一定的机械 强度；耐热、耐腐蚀及不易染菌；耐高温灭菌； 廉价。;（三）透析;四、萃取分离;（一）双水相萃取;成相物A;1. 萃取原理;（二）反胶团萃取;1. 萃取原理;3. 影响因素;五、层析分离;梯度混合器;（一??凝胶层析;混合样品;2. 操作过程;（二）吸附层析;1. 层析原理;（三）分配层析;（四）离子交换层析;2. 离子交换剂的选择与处理;3. 离子交换层析的操作过程;（五）亲和层析;1. 层析原理;2. 亲和层析方法;（六）层析聚焦;（八）高效液相色谱;（九）灌注色谱;六、电泳分离;（一）纸电泳;（四）凝胶电泳;聚丙烯酰胺凝胶的制备：;丙烯酰胺;1. 连续凝胶电泳;浓缩胶：Acr 2 ~ 5%, pH 6.7-6.8 Tris-HCl;3. 梯度凝胶电泳; 在一定条件下，1.4g SDS可与1g蛋白质结合，由于SDS带负电荷，使各种蛋白质- SDS 复合物带上相同密度的负电荷，而掩盖了不同蛋白质之间原来的电荷差异。此外，SDS与蛋白质结合后，引起蛋白质构象的变化，在水溶剂中都变成长椭圆形，短轴长度都为180纳米左右，而长轴长度则与蛋白质分子量成正比，因此SDS-Pr复合物在凝胶电泳中的迁移率不受其原有电荷和分子形状的影响，而只决定于蛋白质的分子量。 ;（五）等点聚焦电泳;（六）双向电泳;第四节 酶的浓缩、干燥与结晶;二、酶的干燥;二、酶的结晶