CD4CD25CD127调节性T细胞在胃癌不同TNM分期中的表达.doc

CD4+CD25+CD127-调节性T细胞在胃癌不同TNM分期中的表达 康文喜 樊 静 河北省秦皇岛市肿瘤医院 邮编：066001 摘要 目的：探讨CD4+CD25+CD127调节性T细胞（Tregs）在胃癌患者不同TNM分期外周血中的表达。方法：采用流式细胞仪检测200例胃癌患者不同TNM分期外周血中CD4+CD25+CD127调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比，并进行比较。结果：胃癌患者外周血CD4+CD25+CD127调节性T细胞占CD4+T细胞比率明显高于健康对照组，P ＜0.05；Ⅳ期明显高于Ⅰ—Ⅲ期, P＜0.01；低分化者明显高于高分化者，P＜0.05；有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者，P＜0.05；差异具有明显统计学意义。 结论: 胃癌患者外周血中的CD4+CD25+CD127调节性T细胞占CD4+T细胞的比例明显升高，可能在胃癌的免疫耐受中发挥重要作用,检测其结果对于判断胃癌的病程进展及预后有一定参考价值。 关键词 ：胃癌 CD4+CD25+CD127-调节性T细胞 流式细胞术 胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国的发病率居各类肿瘤之首。胃癌的发生与机体的免疫状态密切相关，在诸多发病机制中Tregs细胞发挥着重要的作用［1］。CD4+CD25+ 调节性T 细胞（Tregs）由日本学者Sakaguchi等［2］于1995年首次报道。研究发现，Tregs能抑制免疫反应, 防止自身免疫的发生, 诱导免疫耐受。研究证实Tregs 在生理和病理状态下均有重要的免疫调节作用。Tregs细胞具有低反应性与免疫抑制性两大功能特征。在体内发挥免疫调节、维持自身免疫耐受中发挥着决定性作用。胃癌可诱导Tregs增生，致血液中Tregs数量增多。本研究采用流式细胞仪分析胃癌患者外周血CD4 +CD25+ CD127-调节性T细胞表达，探讨Tregs细胞与胃癌不同TNM分期、肿瘤发生、发展的关系及其临床意义。 1.材料和方法 1.1 临床资料：本文收集我院2006年3月-2010年12月收治的胃癌患者200例，其中男性140例，女性60例，年龄28~69岁，平均年龄（42.32±8.69岁），所有病例均经病理学诊断为胃癌。临床TNM分期按照国际抗癌协会标准进行：Ⅰ—Ⅱ期95例、Ⅲ期68例、Ⅳ期37例；其中高分化腺癌83例，中分化腺癌49例，低分化腺癌68例；有淋巴结转移者139例，无淋巴结转移者61例；对照组均为健康体检者共30例。 1.2 主要试剂及仪器：鼠抗人单克隆抗体CD4-FITC、CD25-PC5、CD127-PE；同型对照IgG1、IgG2、红细胞裂解液、流式细胞仪（EPICS XL）购自美国贝克曼库尔特公司。 1.3 实验方法：所有被观察对象均于清晨空腹采集静脉血2ml，经EDTA-2K抗凝，使用直接免疫荧光标记法标记细胞并进行流式细胞仪分析。操作步骤：取单克隆抗体CD4-FITC、 CD25-PC5、CD127-PE及同型对照各20μl，加入100ul EDTA-2K抗凝的外周血，室温下避光孵育15分钟,再加入红细胞裂解液500μl，避光孵育10分钟；加入PBS洗2次，离心1500转/5分钟，弃上清后加入适量的PBS，上机检测。 1.4 统计学处理 应用SPPS13.0 统计软件分析，进行t检验，数据以 （x-±s）表示，P＜0.05 为差异有统计学意义。 2.结果 2.1 胃癌患者外周血调节性T细胞比率与健康者的比较 通过流式细胞仪检测法分析, 胃癌患者外周血CD4+CD25+CD127- Treg占总CD4+ T细胞的比率为4.24%±1. 16 % ,健康对照组为 0.71%±0.32%，胃癌患者外周血Treg比例较健康对照组显著增高( P 0. 05) 。 表1. 胃癌患者与健康者CD4+CD25+CD127-/CD4+T比率的比较 类 别NCD4+CD25+CD127-/CD4+T（%）P对照组300.71±0.32＜0.05胃癌患者2004.24±1.162.2 胃癌患者外周血调节性T细胞比率与临床TNM分期的关系 表2的数据显???，胃癌患者在Ⅲ期、Ⅳ期外周血Treg的比例明显高于Ⅰ期和Ⅱ期，P＜0.01，提示TNM分期越晚, Treg细胞增多越明显。 表2 CD4+CD25+CD127-/CD4+Tregs 在TNM分期的比较 分析对象n CD4+CD25+CD127-/CD4+T（%）P临床分期Ⅰ—Ⅱ期951.25±0.86＜0.01Ⅲ期683.43±1.71Ⅳ期374.28±1.252.3 胃癌患者外周血调节性T细胞比率与癌组织分化程度和淋巴结转移情况的关系