转基因改良面粉白度 梁荣奇2012-9-22.pptVIP

姓 名：梁 荣 奇 副教授 单 位：中国农业大学 研究方向：转基因小麦 2012-9-22;主要内容; 小麦面粉及其面食品的白度是小麦磨粉品质和面食品的主要评价指标，特别是面条、馒头、饺子、烙饼等中式食品对白度的要求相当高。 洁白细腻、光泽度高的面粉及其食品倍受消费者的青睐，具有很好的市场销路和较高的价格。 ; 面粉白度受许多遗传控制和环境影响，影响面条、馒头、饼干等面食品的外观和色泽，主要取决于类胡萝卜素和多酚氧化酶（PPO）的含量。 PPO是引起面团或保鲜食品（如鲜面条）颜色褐变的主要原因。 研究表明，即使是白度较高的小麦品种籽粒（或面粉、面片）也具有一定水平的PPO活性。;PPO是一类广泛存在于植物中的多基因家族表达产物。 Kruger(1974)报道小麦中有12种PPO同工酶； 研究发现：虽然不同物种间PPO的同源性不高，但它们含有2??非常保守的PPO功能区； 小麦籽粒中的PPO同工酶及其活性才直接影响面团以及面食品的白度和色泽。 Demeks等（2002）用RACE法获得大小为1509bp的小麦ppo序列。;Jukanti等（2004）认为，有的PPO基因主要在胚乳发育的特定时期表达（如GenBank NO.AY515506），有的则主要在叶片等其它组织表达（如GenBank NO.AF507945）。; 普通小麦(AABBDD)是异源六倍体，ppo多基因家族成员众多，在天然突变体和人工诱变体等传统育种方法中很难筛选到合适的隐性突变体。 而利用RNAi可克服传统育种方法的局限得到籽粒PPO沉默的植株。 ; 在不影响小麦营养生长和抗逆性的前提下，大幅度改良小麦面粉及其面食品的白度。 为小麦白度的改良、品质育种提供理论依据、实验方法和育种材料。 ;技术路线;主要内容;构建原理;载体构建过程;;小麦籽粒ppo基因RNAi表达载体pBAC47P-ppoIR示意图 ;转基因植株的获得;生根培养基;主要内容; T0代转基因植株PCR检测;由图可知只有株行号为8、15、16、19、21的株行没有检测到FAD2Intron。;T1代转基因株行Southern杂交检测;T1代转基因植株的PCR检测 ——FAD2Intron;T2代籽粒的半定量RT-PCR;ppo的相对表达量; Northern 杂交 “-”：阴性对照 1-14：转基因植株;主要内容;T2代转基因籽粒的PPO酶活性测定 ——酶标板法;株号 ;白度/wh;CK;主要内容;申报了农业部转基因安全评价 ——中间试验，获得了农业部审批 转ppo基因RNA干扰品质改良小麦1-5等在北京市的中间试验 （农基安办字2008-T084，2009年2月4日）;T5株系; 结论;资助项目;祝福大家 快乐安康、生活幸福、家庭美满