临床生物化学常用的技术.pptVIP

临床生物化学检验常用技术; 本 章 主 要 内 容 光谱检验技术 电化学分析技术 电泳技术 干化学技术 PCR技术 ;教学目标和要求 掌握光谱分析中的对比法、摩尔吸收系数法、比浊法测定的方法原理，在生化检验中的应用及注意事项；区带电泳的原理、应用及影响因素；离子选择性电极法测定的原理和注意事项。 熟悉离心技术，其它电泳技术和层析技术中的HPLC及亲和层析的原理和应用；免疫分析技术、生物传感技术的概念和应用原理。 了解色谱、层析等常用生化技术的应用原理和方法，生物芯片技术的概念和应用原理。 ;第一节 光谱分析技术;;光谱分析技术原理：;一、分光光度技术的基本原理;（二）Lambert-Beer定律;吸收曲线（Ａ－Ｃ曲线）;吸光系数的应用;偏离朗伯比耳定律的因素?;分光光度法的结构;分光光度计的使用;（二）吸光度的校正;四、分光光度技术的定性和定量方法;（二）分光光度技术的定量方法;（二）分光光度技术的定量方法;;作图法的步骤;;制作和应用标准曲线时应注意下面几点：;第二节电化学分析技术;电位分析法基本原理;;一、离子选择电极法的原理;离子选择性电极结构;;ISE的特点;离子选择电极分析方法1、标准曲线法2、标准比较法3、标准加入法（消除基质效应）;三、离子选择性电极法测定的影响因素;Attention! ;第三节 干化学分析技术 ;干化学的原理（1）试剂结构;二、分析原理 ;4．试剂层　样品中的水分成为干式试剂的溶剂，试剂与待测物质进行化学反应。试剂层的结构还能控制多步化学反应的反应次序。 支持层为一透明胶片，仅起支撑试剂干片的作用。 ;干化学的原理（3）比色;干化学分析技术的影响因素;第四节 电泳分析技术;一、电泳技术的原理及其影响因素;;3、 缓冲液 （1）缓冲溶质 性质稳定，缓冲容量大、电导低、离子移动好 （2）pH 影响分子电荷性质和电量 (3)离子强度（I） 影响缓冲容量、速度和产热效应 I↑、pH稳定、速度慢、产热多、时间延长、扩散 I↓、 pH不稳定、速度快、产热少；区带不整齐、分辨率 下降 ;4、支持介??? 吸附作用：支持介质对标本的吸附作用 吸附作用使电泳速度减慢，出现拖尾现象。 电渗：电场中液对固相的相对移动 电渗只影响电泳速度，不影响分辨率;蒸发：支持介质水份的蒸发导致缓冲液浓缩，离子强度增加，标本分电流减少，电泳速度减慢；虹吸作用，使标本区带向中间集中并弯曲，导致分辨率下降。（所以，电泳时电泳槽要密闭）;二、电泳类型及应用;（一）. 醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate electrophoresis）;缺点和注意事项： 吸水性差，水份易蒸发。 电泳槽要求密闭，维持水蒸气饱和 电流强度不宜过大，0.4~0.6mA/cm宽。;（三） 琼脂糖凝胶电泳;琼脂糖凝胶电泳优点 电渗作用小 吸附极微 分辨率和重现性均较好 适合分离大分子物质（分子筛效应） 电泳图谱清晰便于扫描并可长期保存 ;;（二）. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE）;常用的催化剂有过硫酸胺和核黄素，加速剂一般用四甲基乙二胺。 凝胶网状结构孔径的大小，决定于丙烯酰胺单体的浓度和甲叉双丙烯酰胺的浓度及两者的比例。;PAGE的三种效应;电泳区带的测定;区带染色法;区带定量分析;电泳的临床应用;;;第六节　自动化分析技术;教学目标和要求 掌握自动生化分析仪的分析方法类型及其 特点，连续监测法的理论K值，必选的分析参数，双波长测定的作用，双试剂的优点，分析仪与手工法比较的优点和缺点。 熟悉分立式自动生化分析仪的基本结构，备选的分析参数，测定过程的自动监测，校准方式和校准要求，影响分析仪分析速度的因素和分析仪性能指标。 了解某些分析参数的特殊意义，分析仪的工作过程和操作方法，干片式分析仪的结构和分析原理，常用分析仪的分析性能。;三、自动化分析与手工操作的比较 ;（二）缺点 ; 自动生化分析仪由电脑控制，将生化分析中的取样(sampling)、加试剂、混匀、保温反应、检测(detect)、结果计算、可靠性判断、显示和打印、以及清洗(cleaning)等步骤组合在一起自动进行操作的分析仪器。 ;第二节 生化自动化分析方法;终点时间的确定;1．一点法（终点法）;图4-3　一点终点法反应曲线 ;2．两点法（two point end assay）;图4-4　两点终点法反应曲线 ; 该法能有效地消除