仪器分析第3章高效液相色谱分析.pptVIP

第三章高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography, HPLC ;§3-1 高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法： 一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。 它在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论，技术上采用了高压泵、高效分离柱、高灵敏度检测器。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;1. 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较 高压： HPLC采用高压输液设备, 150-350*105 Pa 高速： HPLC流速大增，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。 高效：化学键和固定相, 30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测） ;2、HPLC与GC的区别 分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只点有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量、热稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。 流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，和组分之间没有相互的作用力；HPLC采用的流动相为各种极性不同的液体或液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。 ;§3-2 高效液相色谱法理论基础;速率方程： H=A+B/u+Cu （1）液体的扩散系数仅为气体的万分之一，HPLC中速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计， （2）影响柱效的主要因素是传质项。 ;2、提高柱效的途径： 提高柱内填料均匀性，减小固定相粒度（选择薄壳形担体） 选用低粘度的流动相或适当提高柱温，降低流动相粘度; 减小粒度是最有效的途径. ;§3-3 高效液相色谱法 主要类型及分离原理 1、液液分配色谱法 2、液固吸附色谱法 3、离子交换色谱法 4、离子对色谱 5、空间排阻色谱法 ;1、液-液分配色谱;正相色谱与反相色谱比较 正相色谱——固定液极性 流动相极性 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分 反相色谱——固定液极性 流动相极性 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离非极性组分 反相色谱：固定相： C-18柱 流动相：甲醇-水或乙腈-水 ;2、液-固吸附色谱;3、 离子对色谱（分离有机酸、有机碱）;4、 离子交换色谱;5、空间排阻色谱;§3-4 液相色谱固定相;化学键合固定相;化学键合固定相的特点; 2.液-固吸附色谱固定相;3.离子交换色谱分离固定相; 4. 空间排阻分离固定相;§3-5 液相色谱的流动相;2. 选择流动相时应注意的几个问题;3. 流动相选择;§3-6 高效液相色谱仪器;液相色谱仪（1）;液相色谱仪（2）;流程及主要部件 process and main assembly of HPLC;2.主要部件;梯度洗提装置（P84）;(2) 进样系统;(3) 色谱柱;(4) 检测系统;光电二极管阵列检测器（PAD、DAD）;b. 荧光检测器（FLD）; c. 示差折光检测器（通用型检测器） （ differential refractive index detector）;§3-7 高效液相色谱分离类型选择 choice of separation types;2、根据溶解度选择 样品溶于水不离解——反相色谱 样品溶于水并能离解——离子交换色谱 样品溶于烃类（苯或异辛烷）——液固吸附色谱 样品溶于甲醇——反相色谱 3、根???分子结构选择 异构体——液固吸附色谱 同系物——正相色谱、反相色谱 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;§3-8 HPLC的应用 application of HPLC;2. 稠环芳烃的分析;§3-9 液相制备色谱;1.色谱柱的柱容量（柱负荷） 分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超