辣椒中常见产毒性真菌的裸磁珠-多重实时荧光定量PCR检测方法.pdfVIP

J South Med Univ, 2015, 35(1): 23-28 doi 10.3969/j.issn.1673-4254.2015.01.05 ·23· 基础研究 辣椒中常见产毒性真菌的裸磁珠-多重实时荧光定量 PCR 检测 方法 金 燕 1，张薇薇 2，王溯源 1，叶正茂 1，张立实 1，3，裴晓方 1，3 1 四川大学华西公共卫生学院卫生检验与检疫学系，四川 成都 610041；2 成都医学院公共卫生系，四川 成都 610500；3食品安全监测与风险评估四川省重点实验室，四川 成都 610041 摘要：目的 将多重实时荧光定量PCR技术与裸磁珠富集技术联用，建立辣椒样品中常见3类（曲霉属、青霉属、镰刀菌属）产毒 性真菌的快速定量检测方法。方法 根据真菌核糖体RNA（rDNA）基因序列选择真菌广谱引物及属特异性探针，联用裸磁珠富 集技术，建立多重实时荧光定量 PCR体系，并评价所建方法的灵敏度、特异性、重复性和一致性。结果 裸磁珠-多重实时荧光定 量PCR方法灵敏度高，与本研究优化后的普通实时荧光定量PCR相比提高了10倍，是原报道的100倍，直接检测辣椒样品中3 类产毒性真菌的检出限均可达103 CFU/ml，即104 CFU/g，且特异性良好（与非目标菌无交叉反应）、重复性良好（CV1.5%），该 方法模拟检测辣椒样品中 3 类产毒性真菌的计数结果与标准培养法的计数结果相比均无统计学差异（P0.05），实验过程仅 需 7 h（标准培养鉴定法耗时7~14 d）。结论 构建的裸磁珠-多重实时荧光定量PCR方法能大大缩短产毒性真菌的检测时间，并 成功应用于模拟辣椒样品中常见3类产毒性真菌的定量检测，值得进一步研究和推广。 关键词：产毒性真菌；裸磁珠富集；多重实时荧光定量PCR；辣椒模型 Non-modified magnetic beads coupled with multiple real-time PCR for detection and quan- tification of mycotoxigenic fungi in paprika samples JIN Yan1, ZHANG Weiwei2, WANG Suyuan1, YE Zhengmao1, ZHANG Lishi1, 3, PEI Xiaofang1, 3 1Department of Public Health Laboratory Sciences, West China School of Public Health, Sichuan University, Chengdu 610041, China; 2Department of Public Health, Chengdu Medical College, Chengdu 610500, China; 3Key Laboratory of Food Safety Monitoring and Risk Assessment of Sichuan Province, Chengdu 610041, China Abstract: Objective To establish a method for detecting 3 common toxigenic molds (Aspergillus, Penicillium