复旦大学分析化学AII第十一章毛细管电泳选编.ppt

第22章 毛细管电泳 capillary electrophoresis;;;1. 概述（generalization）;(1)、经典电泳分析 traditional electrophoresis;(2)、高效毛细管电泳分析 high performance capillary electrophoresis;2.高效毛细管电泳(HPCE)基本原理;(2).电渗现象与电渗流; 石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。;b.HPCE中电渗流的大小;c. HPCE中电渗流的方向;d.HPCE中电渗流的流形;e. HPCE中电渗流的作用;f、分离过程;3. HPCE中影响电渗流的因素(Zeta电位和粘度) factors influenced electroosmosis;(3). 电解质溶液性质的影响;;(4). 温度的影响;(5).添加剂的影响;4.HPCE中的参数与关系式 ;(3).分离度 ;5.影响分离效率的因素—区带展宽 factors influenced the efficiency—band broadening ;(3).焦耳热与温度梯度的影响 ;(4).溶质与管壁间的相互作用 ;(5).其他影响因素 ;（b）“层流”现象对谱带展宽的影响 一般情况下，HPCE中不存在层流，但当毛细管两端存在压力差时，出现抛物线形的层流； 产生的原因：毛细管两端液面高度不同。 实际操作时，保持毛细管两端缓冲溶液平面高度相同。;6.仪器流程与主要部件 process and main assembly;(1).高压电源; 毛细管结构 ;紫外吸收 ;(3).缓冲液池;7.分离类型;(1).毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE;(2).毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE; 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。; 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动；; 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；; 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移??，形成窄溶质带而相互分离；; 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。; 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； 4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用；; 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程；;(1)、离子分析 analysis of ion;阴离子分析;(2).药物分析 analysis of pharmaceutics;采用MEKC模式，鉴定违禁药物；效果优于HPLG法;(3).手性化合物分析 analysis of chiral compounds;(4).氨基酸与蛋白质分析 analysis of amino acids;蛋白质分析;(5).核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA;9.新进展advances and special topics;作业-P553: