食品中硫氰酸钠测定的标准操作程序.doc

7、食品中硫氰酸钠测定的标准操作程序 7.1 离子色谱法测定牛奶中硫氰酸根 7.1.1适用范围 本方法规定了鲜乳中的硫氰酸钠的测定方法。 本方法适用于鲜乳中的硫氰酸钠的测定方法。 本程序检测限0.1mg/L,定量限：0.3mg/L。 7.1.2 原理 液态奶样品沉淀蛋白、去除脂肪后，用离子色谱分析，电导检测器检测，外标法定量。 7.1.3 试剂 7.1.3.1 试验用水均为超纯水 7.1.3.2 乙腈，色谱纯。 7.1.3.3 固相萃取小柱：OnGuard RP柱（2.5cc），或相当者（如C18），使用前依次用5 ml甲醇和10 ml水活化。 7.1.3.4 硫氰酸钠标准品 7.1.3.5 硫氰酸钠标准储备液：将硫氰酸钠标准品于80度烘箱内烘干2小时。准确称取干燥后的硫氰酸钠1.3966g于1000ml容量瓶中，定容，混匀。即得1000ppm硫氰酸根标准储备液。 7.1.3.6 硫氰酸标准中间液：取硫氰酸标准储备溶液 1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含硫氰酸10 mg/L。 7.1.3.7 硫氰酸标准使用液：移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL硫氰酸标准中间液，用水定容于10 mL容量瓶中，浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L。 7.1.4仪器与耗材 7.1.4.1 离子色谱仪：配备淋洗液发生器和电导检测器； 7.1.4.2 冷冻离心机。 7.1.5 操作步骤 7.1.5.1 样品处理 取5mL液体奶样品(固态奶取1.0g,加水至5mL)，加入5mL乙腈沉淀蛋白，取上清液稀释10倍，过RP柱（或经冷冻离心机）去除脂肪后上机。 7.1.5.2 离子色谱参考条件 色谱柱：强亲水性阴离子交换柱。IonPac AS16，4.0×250mm分析柱；IonPac AG16，4.0×50mm保护柱；或其他相当者。流动相：KOH溶液，梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在线发生器在线产生。 KOH梯度程序如下： 时间（min）KOH浓度（mmol/L）045134513.170187018.1452345流速：1.0 mL/min；抑制器：ASRS-300型抑制器，4mm；抑制器抑制模式：外接水模式，抑制电流175mA；柱温：30℃；进样体积：100 μL。 7.1.5.2 测定 在上述仪器条件下测定标准溶液及样品溶液，并同时测定空白，使用外标法定量。 7.1.5.3 色谱图 图1 硫氰酸根标准图（12.500min） 7.1.6计算 x=c×9×104?? ?? ?…………………………（1） 式中：X——液态奶中硫氰酸的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）； c——由标准曲线得到试样溶液中硫氰酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； 9——液态奶的体积与乙腈体积之和，单位为毫升（mL）； 4——液态奶的体积，单位为毫升（mL）； 10——稀释倍数； 计算结果保留两位有效数字。 7.1.7 精密度 在重复性条件下，获得的硫氰酸的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的10%。 7.2分光光度法测定鲜乳及乳粉中硫氰酸钠含量 7.2.1适用范围 本方法规定了鲜乳及乳粉中的硫氰酸钠的测定方法。 本方法适用于鲜乳及乳粉中的硫氰酸钠的测定方法。本方法的线性范围为：2.0～30毫克/升，最小检出限：液体1毫克/升、固体2毫克/千克. 7.2.2原理： 硫氰酸钠能与三价铁发生反应，生成硫氰酸铁络合离子，使溶液呈血红色可用紫外可见分光光度计测定其吸光度，根据吸光光度曲线确定硫氰酸钠含量。 7.2.3试剂 7.2.3.1三氯乙酸溶液（100克/升）：称取三氯乙酸100克，用纯水溶解并稀释到1000毫升。 7.2.3.2硫酸铁氨溶液（80克/升）：称取硫酸铁氨8克，用纯水溶解并定容至100毫升。 7.2.3.3过氧化氢溶液：吸取35%过氧化氢1毫升于100毫升容量瓶中，用纯水定溶到刻度。 7.2.3.4硫氰酸钠使用液（100毫克/升）：吸取硫氰酸钠储备液1.00毫升于100毫升容量瓶中，用三氯乙酸溶液(3.1)稀释并定溶。 7.2.4仪器与耗材 7.2.4.1分光光度计 7.2.4.2实验室常用设备 7.2.5操作步骤 7.2.5.1试样处理 称取5.00克奶粉或吸取10.00毫升鲜奶于50毫升容量瓶中，加入约30毫升三氯乙酸溶液(3.1)，充分振摇使样品分散完全，加入过氧化氢溶液(3.3)0.5毫升，超声10分钟，用三氯乙酸溶液(3.1)定容到刻度，摇匀后静置10分钟，用滤纸过滤。 7.2.5.2标准曲线 取硫氰酸钠使用液(100毫克/升)0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0毫升于10毫升具塞试管中，加入0.1毫升过氧化氢溶液(3.3)，用三氯乙酸溶液