21药物的现代分析方法.pptVIP

第二十一章药品质量控制中现代分析方法的进展; ; 毛细管电泳及其应用 超高效液相色谱及其应用 手性HPLC技术与应用 GC-MS技术与应用 LC-MS技术与应用 液相色谱-核磁共振联用技术;（一）简介 以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一种液相分离技术 电泳是电解质中带电粒子在电场作用下向电荷相反方向迁移的现象，利用这种现象对物质进行分离分析的方法，称之为电泳法 在散热率很高的毛细管内进行的电泳分析，称为毛细管电泳法;主要特点;（二）基本装置与原理 ;2 基本原理; 显然，淌度是粒子在单位电场强度、单位时间内移动的距离 ; 由于玻璃表面存在硅羟基，pH3时, 形成双电层，在高电场的作用下水合阳离子带动整体溶液向负极移动的现象称为电渗，速度veo ; 带电粒子的迁移速度 vap ＝ 电泳和电渗流两种速度的矢量和; 正离子： 两种效应的运动方向一致，最先流出 中性粒子: 无电泳现象，只受电渗流影响，在阳离子后流出（不被分离） 阴离子： 两种效应的运动方向相反,最后流出 ;HPCE中电渗流的流形;（三）主要分离模式; 2 胶束电动毛细管色谱 MECC ; 系色谱与电泳分离模式的结合，中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长; 凝胶具有多孔性，类似分子筛的作用，使试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，用CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DNA排序的重要手段。 ;特点： 抗对流性好，散热性好，分离度极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。; 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在电场力的作用下迁移，分别到达其等电点pH位置时，呈电中性???停止移动，由此可使它们得到分离 可分离等电点差异小于0.01pH单位的两种蛋白质; 5 毛细管电色谱 CEC;;（四）高效毛细管电泳应用与进展;采用MEKC模式，鉴定违禁药物；;Click to add title in here ;;van Deemter曲线的提示;;更小颗粒度所面临的挑战;;;;; 第三节 手性HPLC技术与应用; 1 对某些手性药物进行对映体的纯度检查； 2 生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临床疗效的关系； 3 在研制手性药物过程中，可分别评价单个对映体的效价、毒性、不良反应以及药动学性质； 4 必要时，可进行手性药物对映体的制备分离（或拆分）;（二）手性药物拆分方法的机理; 色谱法拆分机理; HPLC 拆分法 ;（三）手性HPLC 拆分法分类; 柱前手性衍生化反应的注意事项 手性试剂必须是高光学纯度的试剂 衍生化反应要定量完成（90-100%） 手性待测物必须具有可反应的活性基团 如 -NH2、-OH、-COOH 等 手性试剂及产物应稳定，且具有不同的紫外或荧光特性 生成的非对映异构体应具有较高的柱效 ;手性衍生化反应; 可使用价格便宜、柱效较高的非手性柱 通过衍生化反应可提高检测灵敏度 衍生化过程可同时纯化样品 缺点 需要高纯度的手性衍生化试剂 操作复杂费时，有时需严格控制反应时间和温度; 在流动相中加入手性添加剂，使其与待测物形成对映异构体复合物，依据复合物的稳定常数不同以及药物与结合物在固定相上分配的差异而得到分离; 常用手性添加剂 配基交换型手性添加剂（CLEC） 用于分离氨基酸及其衍生物、多巴胺 环糊精(CD)类添加剂 常用-CD，－CD、改性CD 手性离子对络合剂 常用(+)-10-樟脑磺酸、奎宁和奎尼丁; 利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离 ; 常用的手性固定相 ; CSP 特点;（四）CDR、CMP 和CSP 的比较;拆分实例 酰胺型手性固定相直接拆分克仑特罗对映体;（1）克仑特罗分子上的－NH与固定相萘乙基酰胺部分的－C=O形成氢键作用； （2）克仑特罗分子上的－OH与固定相3,5-二硝基苯甲酰胺的－NH形成氢键； （3）克仑特罗分子上的