实验6网织红血小板计数.pptVIP

实验六 网织红细胞计数 血小板计数;要求;红系祖细胞 ;;(一)染色原理 网织红细胞内RNA的磷酸基（带负电荷）能与溴甲酚蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基（带正点荷）结合，形成核酸与碱性染料复合物的蓝黑色多聚颗粒，其颗粒又联缀成线状甚至网状。凡含有两个以上深染颗粒（或具有线网状结构）的无核红细胞，即为网织红细胞。;(二)试剂 煌焦油蓝染液（1%） 煌焦油蓝 1g 枸橼酸钠 0.4g 氯化钠 0.85g 蒸馏水加到100ml，充分溶解过滤备用。 ;（三）操作 显微镜计数法 2d染料+2d全血（1：1）混匀后染15min，倾少许玻片上，制备薄膜片，晃动玻片使迅速干燥，低倍镜浏览全片，选细胞分布均匀无重叠染色良好部位，油镜下观察1000个红细胞中网织红细胞数目。 参考范围 成 人：0.008~0.02 新生儿：0.02~0.06 其它方法： 网织红细胞计数仪 荧光激活??胞术 流式细胞术 ;;（四）注意事项 1、红细胞必须含两个或两个以上蓝色颗粒，且无需微调显微镜即可见。颗粒必须远离细胞边缘，以免与变性珠蛋白小体混淆。 2、染色时间必须充分，当室温较低时，需适当延长染色时间或置37℃水浴箱内 。 3、制片应厚薄适宜，否则会造成网织红细胞分布不均。 4、网织红细胞体积较大，常在血膜尾部和两侧较多，计数应该兼顾。 5、复染会使网织红数值降低，因此不采用瑞氏染料复染，用二甲苯擦涂片也会使结果降低。 6、染料配制必须祛除沉渣。 ;方法学评价;临床应用;二、血小板计数;（三）操作步骤 1、2ml红细胞稀释液 2、采集10ul末梢血，充分混匀 3、混匀的血小板悬液充池，静置10min，高倍镜下计数中央大方格的血小板数。 4、计算：N* 10* 200* 106/L 参考范围 （100-300）*109/L;;（四）注意事项 1、针刺应稍深，保证采血顺畅，忌挤压，操作要迅速，无需擦掉第一滴血，若同时做其他实验时，先做血小板计数。 2、所用器材和稀释液必须清洁，无菌无尘。器材应标准化 3、血小板易聚集，充池前应充分混匀但不能用力太大，会破坏血小板 4、待血小板下沉后再计数，否则结果偏低 5、应在1h内计数完毕，否则结果偏低 6、注意血小板与杂质、结晶等区别。 7.检查前，应避免服用影响到血小板功能的药物;（五）方法学评价; （六）临床意义;　;