Pcr的发展史材料.pptxVIP

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2017-04-24 发布于湖北
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Pcr的发展史材料.pptx

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Pcr的发展史;背景;Pcr的原理及反应体系;反应体系;Pcr的发展过程; 此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较传统的基因扩增具备许多突出的优点，但由于Klenow酶不耐热，在DNA模板进行热变性时，会导致此酶钝化，每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，给PCR技术操作程序添了不少困难。这使得PCR技术在一段时间内没能引起生物医学界的足够重视。（2） 1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR，其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。（3）1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。此酶具有以下特点：①耐高温，在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。 ;②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度 (2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率，因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别，将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。 ;Pcr的四个技术革新;第二代：自动化控制型定性基因扩增仪优点：具有代表性的扩增仪，是三代，四代仪器的基础。缺点：①无法对初始模板精确定量 ②无法实时监测扩增情况 ③跑胶麻烦，易污染;第三代：终点定量;第四代：实时定量pcr;研究意义;THANKS