《分子生物学实验》试题答案.pdfVIP

2012-2013 第一学期 《分子生物学实验》试题 1. 某同学将实验一和实验二所提到的产 M1 2 物利用琼脂糖凝胶电泳分离，结果如 A 图 1。其 中 M 为 Lambda DNA/EcoRI+ HindIII Marker。由于该生粗心，没有 B 记录各泳道上样的成分。 C 1) 请根据图 1 分析回答泳道 1 和 2 各 是哪次实验的产物（各 4 分）： 图1 泳道 1：实验一（细菌染色体 DNA） 泳道 2：实验二（pUC19 质粒 DNA， 超螺旋构型） 大部分同学都能回答正确，很好！ 2) 请说明各条带可能是什么（各 4 分）： 条带 A: 细菌染色体 DNA 条带 B: pUC19 质粒 DNA，超螺旋构型 条带 C:RNA 大部分同学都能回答正确，很好！ 3) 该同学在将泳道 1 的样品用紫外分光光度计进行了检测，得 到 A260/A280=2.3，试分析原因，并设计一个方案将该样品中 的主要污染物去除（20 分）。 由吸光值和图 1 对照可知，泳道 1 中的条带 C（即 RNA）是造成 A260/A280 比值过大原因，即染色体 DNA 中混有 RNA 污染。 去除方法：加入 RNA 酶降解，而后电泳检测是否降解完全。 部分同学谈及了其它导致 A260/A280 比值增大的原因，但那些原因不 适用本题情况。这些同学没有将 A260/A280 比值与电泳结果（即图 1） 联系在一起分析。 4) 试画出 B 条带的 DNA 分子， I. 经 HindIII 单酶切后的电泳图（5 分）。 II. 经 HindIII + BamHI 双酶切后的电泳图（5 分）。 I II 2686 bp 2656 bp 30 bp 大部分同学都能回答正确，很好！ 2. 现有 pUC19 溶液浓度为 5ug/ul；有限制性内切酶 BamHI 和 HindIII ，浓度为 20U/ul。现欲将 10ug 的 pUC19 DNA 用上述 两种酶进行双酶切，试写出一个总体积 20ul 的双酶切反应体系 及说明反应条件（25 分）。 由于本题在各班的试卷中不同，故加入体积有所改变，但原则一致。 加入体积 原则 ddH2O 12ul Acetylated BSA 2μl (总体积的 1/10) 10×通用缓冲液 2μl (总体积的 1/10) 质粒 DNA 2μL （要酶切的质粒质量/浓度）， 如：10ug/5ug=2 BamHI (20U/μL) 1μl (两种酶加入体积之和不超过 EcoRI (20U/μL) 1μl 总体积的 1/10 即可) 总体积 20 μL 反应温度：37℃， 酶切时间=（