S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程讲解.doc

标准化操作规程 作业指导书 SOPREG007.01 赣州市人民医院输血科 第  PAGE 9 页 共  NUMPAGES 9 页 SOPREG007.01 第  PAGE 9 页 共  NUMPAGES 9 页 文件名红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程编制人审核人批准人批准日期修改日期签 字修改日期签 字复审日期签 字复审日期签 字 红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程 一、目的 为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。 二、方法 采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD血型。 三、原理 将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM试剂，检测人红细胞ABO、RhD抗原。第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性对照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。 四、适用范围 适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型复查。 五、仪器设备 普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器； 六、试剂 1、试剂名称：ABO、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）； 试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒；贮藏条件；18-25℃避光保存；有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥32；特异性试验合格。 2、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒； 试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻；有效期：自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。 七、检测样本要求 1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。 2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。 3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。 4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。 八、操作步骤 1、将被检者血样标本在3400r/min（1200g）离心5分钟； 2、将微柱凝胶试剂卡进行标编号； 3、待检者与标准红细胞稀释悬液的制备：采用塑料试管将被检者红细胞（10ul压积红细胞加入1.2ml生理盐水中）及标准红细胞（0.5ml标准红细胞试剂+3.0ml生理盐水）配制成0.5～0.8%红细胞生理盐水悬液。 4、将待检者红细胞稀释悬液分别加入第一至第四管中，每管50ul； 5、将待检者血清分别加入第五支和第六支微管中，每管50ul； 6、将A型和B型稀释标准红细胞悬液分别加入第五支和第六支微管中，每管50ul； 7、即刻使用血型血清学多用离心机离心5分钟，2分钟900rpm，3分钟1500rpm，取出肉眼判定结果。 8、结果判定：见表1。 （1）阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。 反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。 （2）阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的底部。 （3）对于红细胞RhD血型阴性的样本，应进一步作红细胞RhD阴性确认试验。 表1 微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO、RhD血型结果鉴定 血型抗A抗B抗D阴性对照A1细胞B细胞D 阳 性A+-+--+B-++-+-O--+-++