BLI技术应用-新型生物制品快速定量技术—案例.pptx

新型生物制品快速定量技术——BLI 技术应用 China User Meeting 2016-4-8 陈涛 Agenda 直接定量法 抓取定量法 双抗夹心法（无信号放大） 双抗夹心法（有信号放大） 竞争法（无信号放大） 竞争法（有信号放大） 使用BLI技术进行浓度定量 nm shift Time 传感器 起始斜率与浓度呈正比。 分析物测试在几分钟内完成。 可以检测粗样品 直接测定非标记分析物的结合！ 直接定量法 ---------------analyte proA/proG/proL/AMQ/AHQ/GST/HIS IgG,GST/his tag Initial slope 检测浓度范围:0.1ug/ml-200ug/ml 重复性:5% 再生次数（proA/proG/proL/AMQ/AHQ/GST/HIS）10 times；（SA/AR2G）视固化稳定性而定 耗时:1-2 min/8 samples 软件匹配:可以 是否需要其他试剂:不 计算方法:起始斜率 应用领域：蛋白，病毒的定量 或者做Customized biosensor:SA/AR2G 固化抗体 直接定量法举例----使用proA传感器定量hIgG 抓取定量法 ---------antibody------analyte proA/proG Protein/virus Initial slope 定量范围:0.1ug/ml-500ug/ml 重复性:5% 再生次数:10 times 时间:10 min/8 samples 软件兼容性:yes 需要的其他试剂:抗体或者受体 分析方法:initial slope 应用:蛋白，疫苗类样品的快速定量 Regeneration，pH1.7 glycine 抓取定量法举例----某种病毒疫苗 Lot 1 Lot 2 Step Type Assay Time(s) solution Baseline 60 Antibody buffer Loading 300 20ug/ml Ab(3ug/ml for 2Ga) Baseline 60 antigen buffer Association 180 antigen dilutions 双抗夹心法（无信号放大） 定量范围:0.001ug/ml-10ug/ml 重复性:5% 再生次数10 times(not applied to SA biosensor) 时间:15-20 min/8 samples 软件是否匹配:yes 分析方法:R equilibrium 需要的其他试剂:one binding partner(virus/saccharide),two binding partner(monomer protein) 应用:生物大分子的快速定量 proA biosensor ---------Ab--------analyte-------HIgG block-------Ab Regeneration，pH1.7 glycine SA biosensor ---------Ab--------analyte-------Ab virus/saccharide R equilibrium 双抗夹心法（无信号放大）举例----某种疫苗定量 Ab loading vaccine binding HIgG block Ab binding 20ug/ml 2ug/ml 0.2ug/ml 0.02ug/ml 0.002ug/ml 20ug/ml 2ug/ml 0.2ug/ml 0.02ug/ml 0.002ug/ml 双抗夹心法（有信号放大） 定量范围:0.001ug/ml-1ug/ml 重复性:5-10% 再生次数:no regenerable 实验时间:30 min/8 samples 软件是否匹配:yes 分析方法:R equilibrium 需要的其他试剂:one binding partner(virus/saccharide),two binding partner(monomer protein),Enzyme,DAB 应用:residual contamination,PK,diagnosis kit SA biosensor ---------Ab-----analyte-----2nd Ab-----enzyme---DAB Protein/virus/saccharide R equilibrium 双抗夹心法（有信号放大）举例----CHO HCP kit 竞争法（无信号放大） APS/AR2G ---------analyte-----analyte mixed with Ab Small